[发明专利]一种肝素寡糖及其在制备抗血管生成药物中的应用

说明书

本发明公开了一种肝素寡糖及其在制备抗血管生成药物中的应用。属于生物医药领域。本发明采用碱性成纤维细胞生长因子bFGF刺激人脐静脉内皮细胞建立细胞异常模型，通过体外血管生成和免疫共沉淀等实验研究肝素寡糖对于内皮细胞体外血管形成的影响及机制，结果显示肝素寡糖破坏血管内皮细胞的管形成并且抑制细胞的增殖和迁移，其中1μM的肝素寡糖效果最佳；同时肝素寡糖显著下调细胞表面受体FGFR2的mRNA和蛋白表达水平，并且抑制bFGF同FGFR2的结合，表明FGFR2是肝素寡糖抗血管生成的重要靶点之一。此研究可为治疗新生血管异常生成导致的肿瘤生长转移提供新的途径。

技术领域

本发明涉及肝素寡糖分子量为3200D，具有抑制血管内皮细胞体外血管形成的作用，提供其制备抗血管生成药物的应用，属于生物医药领域。

背景技术

血管可以为癌细胞提供营养和分解代谢物交换，并促进原发肿瘤和转移性肿瘤之间的通讯。因此，血管生成对于癌症发展至关重要，并成为癌症治疗的潜在靶向方法。研究发现肝素和低分子量肝素能够延长癌症患者的生存期以及在动物体内具有显著的抗肿瘤转移作用；而且肝素抗肿瘤活性不依赖于其抗凝活性，而是通过抑制新生血管生成、阻断肿瘤细胞粘附等实现的。血管内皮细胞增殖和迁移是血管新生的重要环节，阻止血管内皮细胞增殖和迁移有可能抑制恶性实体肿瘤的生长和转移。

中国专利专利号为CN201010139398.9，专利名称：一种肝素十二糖、其制法及其抗血管平滑肌细胞增殖的用途；详细叙述了肝素寡糖的制备方法。

本研究中肝素寡糖为采用亚硝酸裂解法裂解肝素、经Bio-gel P6分子筛层析分离纯化制得分子量为3200D左右的肝素十二糖，其在体内的靶器官即为血管内皮。已有实验表明此分子量的肝素寡糖对于碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促血管内皮细胞的增殖作用有抑制效果。但是对于肝素寡糖抑制抗血管生成的作用还未进行研究，这有助于阐明肝素寡糖的抗肿瘤转移机制。

发明内容

本发明的目的是研究肝素寡糖抑制体外内皮细胞血管形成的机制，提供肝素寡糖作为抗血管生成药物的应用。

本发明的技术方案是：一种肝素寡糖，采用亚硝酸裂解法裂解肝素，经Bio-gelP6分子筛层析分离纯化制得分子量为3200D的肝素十二糖。

一种肝素寡糖在制备抗血管生成药物中的应用；所述肝素寡糖能抑制血管中内皮细胞的体外管腔生成、增殖和迁移。

进一步的，所述肝素寡糖作为抗血管生成时的FGFR2抑制剂，其能下调成纤维细胞生长因子受体FGFR2的mRNA和蛋白表达水平。

进一步的，所述肝素寡糖能抑制成纤维细胞生长因子bFGF和其受体FGFR2的结合作用。

进一步的，所述肝素寡糖通过添加药学上可接受的载体制备成临床需要的各种制剂。

本发明的有益效果：本发明采用不同浓度的肝素寡糖作用于人脐静脉内皮细胞细胞HUVEC，选择bFGF生长因子刺激内皮细胞异常增殖和迁移，结果发现肝素寡糖可以剂量依赖性的抑制内皮细胞体外血管形成、增殖和迁移，显著下调碱性成纤维细胞生长因子受体FGFR2的mRNA和蛋白表达水平，同时可以抑制bFGF和其受体FGFR2的结合。此研究可为治疗新生血管异常生成导致的肿瘤生长转移提供新的途径。

附图说明

图1为本发明中体外血管生成实验确定肝素寡糖对HUVEC细胞管腔形成作用的细胞图；

图2为本发明中MTT实验确定肝素寡糖对HUVEC细胞增殖作用的数据统计分析结果图；

图3为本发明中细胞划痕实验确定肝素寡糖对HUVEC细胞迁移作用的细胞图；

图4为本发明中细胞划痕实验中各实验组迁移距离的数据统计分析结果图；