[发明专利]一种靶向敲除blaNDM-1基因的sgRNA序列及其应用在审
| 申请号： | 201911080516.0 | 申请日： | 2019-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN110923230A | 公开（公告）日： | 2020-03-27 |
| 发明（设计）人： | 肖永红;尉骁;郑焙文;罗琦霞;叶静;金晔 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/74;C12N15/90;C12N15/55 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 贾玉霞 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 blandm 基因 sgrna 序列 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种靶向敲除blaNDM-1基因的sgRNA序列，该序列包括blaNDM-1sgRNA-F和blaNDM-1sgRNA-R，其中，blaNDM-1sgRNA-F为SEQ ID NO.1，blaNDM-1sgRNA-R为SEQ ID NO.2。
2.一种靶向敲除blaNDM-1基因的CRISPR/Cas9质粒载体系统，其特征在于，该质粒载体系统为权利要求1所述的靶向敲除blaNDM-1基因的sgRNA序列和CRISPR/cas9载体的重组表达质粒载体，其序列为：SEQ ID NO.3。
3.一种靶向敲除blaNDM-1基因的CRISPR/Cas9质粒载体系统的构建方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)使用BamI酶切CRISPR/Cas9质粒载体pcas9，得到酶切后的CRISPR/cas9载体。
(2)将权利要求1所述的靶向敲除blaNDM-1基因的sgRNA序列的blaNDM-1sgRNA-F和blaNDM-1sgRNA-R退火得到双链DNA序列，将所述的双链DNA序列与酶切后的CRISPR/Cas9质粒载体连接，得到靶向敲除blaNDM-1基因的CRISPR/Cas9质粒载体系统。
4.一种如权利要求2所述的CRISPR/Cas9质粒载体系统在靶向敲除产酸克雷伯菌blaNDM-1基因的应用。
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