[发明专利]一种基于硒磷酸合成酶活性的富硒酵母复壮方法

说明书

本发明涉及一种基于硒磷酸合成酶活性的富硒酵母复壮方法，属于酵母技术领域。具体操作步骤如下：（1）菌种的活化，（2）H₂O₂初筛处理，（3）高硒磷酸合成酶活性富硒酵母的复筛。本发明经复壮的富硒酵母菌株富集有机硒的能力大于2000μg/g干重菌体，为富硒酵母高水平将无机硒转化为有机硒的发酵生产提供了优良菌种保障。与现有的富硒酵母菌株复壮方法相比，本发明以硒磷酸合成酶活性为筛选指标可直接筛选出高水平将无机硒转化为有机硒的酵母菌株，克服了现有复壮方法在复壮过程中存在富集有机硒能力无法直接判断、易造成复壮失败的问题；以H₂O₂为选择因子，大大减少了工作量，避免了用无机硒作为选择因子时存活的菌株富集有机硒能力的不确定性。

技术领域

本发明属于酵母技术领域，具体涉及一种富硒酵母复壮方法。

背景技术

硒位于元素周期表的第VI族，是人体必需的微量元素，具有抗氧化、提高机体免疫力、抗衰老等生物学活性，在人体中枢神经系统、男性生殖系统、内分泌系统、运动系统、心血管系统等功能稳态维持中发挥重要作用，人体长期缺硒易导致克山病、大骨节病、糖尿病、心脑血管病、神经退行性疾病等多种疾病的发生。硒在自然界以无机硒和有机硒两种形式存在，无机硒毒性较大，易对人体健康产生危害；而有机硒的毒性远低于无机硒，且更易被人体吸收，生物利用度高，适量补充有机硒对人体健康极为重要。

富硒酵母作为一种食品级有机硒补充剂，是目前应用最为广泛的人及动物补硒来源。富硒酵母是通过在酵母生长的培养基中添加无机硒，经酵母自身的生化代谢将无机态的硒转化为有机态的硒而获得的，其核心品质是富含高水平的有机硒，决定于酵母富集有机硒的能力。但富硒酵母菌种在长期的传代和保藏过程中由于内外因素所致的遗传突变不可避免会发生各种衰退，其中富集有机硒能力的衰退将直接影响富硒酵母在发酵时对无机硒的转化，降低富硒酵母产品的有机硒含量，进而降低企业的生产性能和经济效益。因此，对富硒酵母富集有机硒的能力进行复壮十分重要。

微生物菌种的复壮通常采用分离纯化法，即经平板分离、性状测定，从众多衰退的菌种群体中筛选出极少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌种典型性状的目的。富硒酵母的复壮，其关键是分离、筛选出具有高富集有机硒能力的菌株，当前的方法是用含高浓度无机硒的培养基进行筛选复壮。然而，存活的酵母对高浓度无机硒的耐受常常表现为酵母对无机硒进入细胞的抵抗或酵母对无机硒的富集，并没有将无机硒转化为有机硒。

当前，富硒酵母的复壮方法，得到众多菌落只需经过1 周左右的涂布实验就可有结果，而若要获知复壮后的富硒酵母的富硒能力大小，则需要对复壮后的富硒酵母进行1个月～3个月的发酵、有机硒检验实验，这样不仅耗时，延长复壮周期，增加复壮的工作强度，且在生产过程中不能及时有效判定复壮酵母富集有机硒能力的大小。因此，选择快速、准确的一种在复壮过程中可直接反映酵母高水平将无机硒转化为有机硒的方法，对富硒酵母的复壮及富硒酵母的发酵生产、研究具有重要意义。

在富硒酵母中，硒蛋白是有机硒的一种主要存在形式，其含量高低与酵母将无机硒转化为有机硒的能力大小直接相关，反映了酵母富集有机硒的水平；而在硒蛋白的生物合成中，硒代磷酸（SP）是活性硒供体，它由硒磷酸合成酶（SPS）催化生成，该酶是硒蛋白合成的限速酶，其活性的高低直接决定了活性硒供体的水平，进而决定了硒蛋白等有机硒的合成水平。也就是说，SPS是硒蛋白合成的调控限制性酶， SPS活性的大小与硒蛋白合成量呈正相关，所以，SPS活性大小可以直接体现富硒酵母富集有机硒能力的大小。可见，通过建立一种方法以有效筛选出具有高SPS活性的酵母菌株，将能实现富硒酵母简单、快速、定向的复壮。

发明内容

为了解决现有富硒酵母的复壮方法不能直接反映无机硒转化为有机硒的能力、存在筛选出的菌株能否将无机硒高水平转化为有机硒的不确定性等问题，本发明提供一种基于硒磷酸合成酶活性的富硒酵母的复壮方法。

一种基于硒磷酸合成酶活性的富硒酵母复壮操作步骤如下：

（1）菌种活化