[发明专利]一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用

说明书

本发明涉及类风湿性关节炎药物研究领域，特别是指一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用。本发明提供的核酸适配体，在保留与DEK蛋白高亲和力结合的基础上，稳定性显著提高。该适配体可以通过与DEK蛋白结合抑制中性粒细胞形成NETs的能力，从而抑制炎症发生。本发明所述的核酸适配体具有广阔的应用前景，有望成为治疗类风湿性关节炎的新型核酸分子，在临床应用上具有巨大的潜力。

技术领域

本发明涉及类风湿性关节炎药物研究领域，特别是指一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用。

背景技术

类风湿性关节炎（RA）是一种全身慢性免疫紊乱性疾病，该疾病特征是关节疼痛、肿胀、僵硬和骨组织和软骨组织破坏，严重者甚至丧失行动能力，造成患者的生活质量严重下降，患者寿命缩短。风湿性关节炎的病理改变主要为关节腔滑膜细胞增生，炎性细胞侵蚀发炎关节，关节腔内新生血管生，关节腔内炎症因子网络紊乱，生成一系列酶，侵蚀软骨及软骨组织，导致关节损伤和畸形。目前，临床上常用药物控制类风湿性关节炎发展和恶化，还不能被完全治愈。因此，研发一种高效、特异、稳定的治疗方法对类风湿性关节炎的防治具有重要意义。

随着对RA发病机制研究的不断深入，中性粒细胞在RA关节局部的炎症发展和全身免疫反应过程中发挥着重要作用。中性粒细胞外陷阱（Neutrophil Extracellular Traps，NETs）是由中性粒细胞释放到胞外的包含有DNA、组蛋白、髓过氧化物酶、中性粒细胞弹性蛋白酶、组织蛋白酶G的网状结构。NETs可以将炎症因子和多种自身抗原外化，是瓜氨酸化自身抗原的来源，可诱导ACPA的产生，并激活成纤维细胞样滑膜细胞及B细胞。而ACPA和炎症因子（TNF-α，IL-8等）可以刺激NETosis的增强，进而导致恶性循环的产生，逐渐加重自身免疫反应。因此，及时抑制或清除异常的NETs，可有望减轻类风湿性关节炎的炎症反应。DEK蛋白是多细胞生物中含量丰富的可磷酸化核蛋白，参与染色质结构和基因调节，能够移位到细胞质进而分泌到细胞外。磷酸化和ADP-核糖基聚合化作用都可以使DEK蛋白从凋亡的细胞核进入细胞外而成为自身抗原。炎症部位活化的中性粒细胞能将DEK蛋白分泌至细胞外，其对NETs的产生十分重要。因此，DEK蛋白有望作为治疗类风湿性关节炎的新型靶标。

适配体（Aptamer）是能够紧密结合特定靶标的单链DNA或RNA分子。适配体具有高特异性、低免疫原性、易大规模合成且价格合理、几乎没有或不存在批次间变化、物理稳定性好和易化学修饰等有优点，在分析诊断和医药研究等领域中具有广阔的应用前景。

然而，由于没有修饰的适配体在体内易被核酸酶降解，分子量较小易被肾脏滤过等缺点，限制了其作为治疗剂的应用。解决这个问题的方法包括对核酸适配体的核糖2’位进行化学修饰、核酸骨架修饰、核酸末端基团修饰（如PEG、胆固醇）等。类风湿性关节炎的治疗是一个长期的过程，未修饰的DEK适配体无法在体内发挥良好的药效。目前，将靶向于DEK蛋白的适配体用于类风湿性关节炎的治疗还没有报道。

发明内容

本发明提出一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用，解决了现有技术中适配体稳定性低、生物利用率低，不能用于制备预防和治疗风湿性关节炎药物中遇到的技术问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体，所述核酸适配体为在原始适配体的序列基础上，经化学修饰、基团修饰或/和序列延长得到的优化适配体，其中原始适配体的序列如SEQ ID No.1所示。

所述化学修饰指在核酸适配体上进行2’-OMe修饰。

所述序列延长指在核酸适配体的3'端增加反式脱氧胸苷。

所述基团修饰指在核酸适配体的5'端增加胆固醇。