[发明专利]鉴定金黄色葡萄球菌及其耐药性的引物探针组合

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴定金黄色葡萄球菌及其耐药性的引物探针组合。本发明提供的引物探针组合中，包括针对金黄色葡萄球菌的通用引物、探针，以及针对甲氧西林耐药型金黄色葡萄球菌的特异性引物、探针。该引物和探针具有良好的特异性，结合real time PCR检测方法，能够实现对SA和MRSA的快速、准确、灵敏的鉴定。实验表明，本发明的引物探针的检测金黄色葡萄球菌的最低检测限为3CFU/ml，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最低检测限为5CFU/ml。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴定金黄色葡萄球菌及其耐药性的引物探针组合。

背景技术

金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus，SA)是革兰氏阳性球菌，是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，可引起社区和医院感染。近年来，随着青霉素的广泛使用，有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶，能水解β-内酰胺环，表现为对青霉素的耐药，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcusaureus，MRSA)耐药性增强现象越来越引起人们的重视。

金黄色萄萄球茵的检测方法多种多样，细菌分离培养是微生物检测的“金标准”，该法虽然可靠，但耗时、费力不能满足快速检测的需要，常用的免疫荧光法虽然具有一定特异性和敏感性，但由于抗体的种类和浓度的影响，结果不稳定，有时会出现假阳性。为克服上述问题，多重荧光定量RT-PCR技术被用来诊断SA和MRSA的感染，这种方法具有快速、敏感、特异性强等特点，探针具有高度保守型，大大地提高了检测效率。

但是目前，针对SA及MRSA鉴定的基因片段的选择和引物探针的涉及存在不合理的现象，导致多数检测试剂无法实现准确、快速、灵敏的检测。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供鉴定金黄色葡萄球菌及其耐药性的引物探针组合，该引物探针组合能够准确、快速、灵敏的实现对SA和MRSA进行鉴定。

本发明提供的引物探针组合其包括：

如SEQ ID NO.1～2所示的金黄色葡萄球菌的特异性引物对；

如SEQ ID NO.3所示的金黄色葡萄球菌的特异性探针；

如SEQ ID NO.4～5所示的甲氧西林耐药性检测引物对；

和如SEQ ID NO.6所示的甲氧西林耐药性检测探针。

本发明中金黄色葡萄球菌的引物和探针用于对金黄色葡萄球菌定性，不论是甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌还是敏感性的金黄色葡萄球菌，都能够被该引物或探针检测。甲氧西林耐药性检测的引物和探针用于检测金黄色葡萄球菌中甲氧西林的耐药基因，其对敏感型的金黄色葡萄球菌不会产生扩增，但对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌会产生扩增信号。

本发明中，SEQ ID NO.1～2所示引物对扩增的片段如SEQ ID NO:11所示；

如SEQ ID NO.4～5所示引物对扩增的片段如SEQ ID NO:12所示。

本发明所述的引物探针组合还包括：

如SEQ ID NO.7～8所示的内标扩增引物对；

如SEQ ID NO.9所示的内标探针。

本发明中，所述内标的序列如SEQ ID NO:10所示。

本发明中，所述探针的3’端连接淬灭基团，5’端连接荧光基团；其中：

如SEQ ID NO.3所示探针的5’端连接FAM荧光基团；

如SEQ ID NO.6所示探针的5’端连接ROX荧光基团；