[发明专利]一种在制备饲料级胰酶中的灭活病毒的方法

说明书

本发明提供一种从胰渣中提取饲料级胰酶过程中的灭活病毒的方法，它将原料胰渣经过粉碎、溶解、板框压滤后，上清液加入有机溶剂和活性剂进行病毒灭活，再经超滤、制粒、包衣和干燥，分装得制品。通过有机溶剂和活性剂破坏病毒的脂质包膜，同时保持胰酶的结构和功能，使制品纯度和活性提高，不仅病毒灭活操作简单，处理时间短，经济实用，而且该发明具有污染小、设备简单、生产周期短、无需添加激活剂、性质稳定便于保存、安全性好等特点。

技术领域

本发明涉及胰酶制剂和在生产胰酶制剂过程中灭活病毒的方法，属于生物技术领域，特别涉及有机溶剂和活性剂在制备饲料级胰酶过程中灭活病毒的方法。

背景技术

乳仔乳仔猪、雏鸡、雏鸭、乳牛等幼龄动物消化道发育不全，内源性消化酶系没有建立，再加上早期断奶等饲养应激，幼龄动物非常容易出现营养性腹泻和其他原因的腹泻，实际生产中通常使用抗生素进行饲喂或治疗，从而导致抗生素残留和超量使用。通过添加合适的酶制剂，可以预防幼龄动物营养性腹泻的发生，从而减少抗生素的使用。

胰酶，是一种具有特殊功能的蛋白质。医药行业胰酶主要用于消化不良，食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障碍，同时也适用于先天性胰功能不全、腹部手术和外伤胰腺切除导致的胰功能不全。或未经手术切除后天引起的胰功能不全及酒精中毒引起的慢性胰腺炎等。同样，胰酶在饲料行业也有广泛的应用价值，它不仅可以给动物提供蛋白质来源，由于其中含有大量具有生物活性的成分，如蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶和活性肽。

目前工业胰酶的传统制备工艺多以猪或牛胰脏为原料，经原料处理(刨片、磨浆)、激活、提取、分离(过滤、沉淀、压榨)、脱脂、制粒、干燥、粉碎等多道工序。药物用血管紧张素的提取原料来源于粗酶粉(来源于猪的胰腺)，粗酶粉中含有血管紧张素以外，还同时含有胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶。而提取血管紧张素的工艺主要是采用水洗和特定分子滤膜过滤，对其中的酶破坏较小。粗酶粉提取药物用血管紧张素后剩余的胰渣用作制备胰酶的原料具有一定的经济价值和可行性，充分综合利用了胰渣资源，在环境保护及资源节约方面具有重大意义。

为了保证该制品的安全性，除要控制猪的饲养环境和原料胰渣的质量外，在胰酶的生产过程中，如何有效的除去或灭活原料中的病毒，是获得安全可靠的饲料胰酶产品的关键问题。

随着动物源性组织制备的制品逐渐增多,加之动物源性产品原材料质量控制未引起足够重视,目前动物源性产品病毒感染畜禽的风险性和潜在的医源性感染问题变得日益突出。为确保制品的安全性,在生产工艺中增加有效的病毒灭活/去除措施是非常必要的。目前国内外较为成熟的去除和灭活病毒的方法主要有化学法和物理法。

1、化学法

化学灭活法是利用化学药品或酶使微生物、活性物质的一些结构发生改变，从而丧失生命力、感染性、毒性或活性。化学灭活效果确实、方法简便而最为常用，但化学灭活的效果常受灭活剂种类、剂量和作用温度、pH、时间等因素影响，微生物的种类和含氮量及是否存在有机物等因素有关，因此必须筛选最佳的灭活条件。

1.1有机溶剂/表面活性剂(S/D)法

早在20世纪80年代中期S/D法开始发展应用，目前依然是血液制品中一种核心的病毒灭活方法。此方法的基本原理是：有机溶剂和非离子表面活性剂的混合物能够破坏脂包膜病毒的类脂膜，从而使类脂从病毒表面脱落，使病毒失去黏附和感染细胞的能力。Roberts PL(2008)对S/D法用于高纯度的凝血因子进行病毒灭活的有效性进行了详尽的考察。结果显示，以0.3％的TN-BP和1％的Triton－X100为S/D试剂，在22℃条件下处理30min后可以对凝血因子制品中的牛痘病毒、单纯疱疹病毒、辛德毕斯病毒等模拟脂包膜病毒进行有效的灭活，证实了S/D法用于脂包膜病毒灭活的稳健性和有效性。S/D法主要用于凝血因子制品、蛋白酶抑制剂、人免疫球蛋白等血液制品的脂包膜病毒的灭活。

1.2低pH孵放法