[发明专利]一种探针、检测四环素的方法及应用

说明书

本发明公开了一种探针、检测四环素的方法及应用，包括信号载体和四环素抗体，信号载体为金属多巴胺框架，所述的金属多巴胺框架的粒径为250～300nm。通过合成一种金属有机骨架材料(MOFs)金属多巴胺框架(Metal‑Polydopamine Framework,MPDA)标记四环素抗体，制成探针，因其表面积大，所以标记极少量的抗体就可以实现灵敏检测四环素。本发明利用该探针构建的免疫层析试纸条具有灵敏度高，特异性好的优点，对四环素的视觉检测限(vLOD)为0.045ng/mL，比传统金标试纸条提高了66倍的灵敏度。同时具有良好的实际应用性。

技术领域

本发明属于生物技术(免疫学)检测领域，具体涉及一种探针、检测四环素的方法及应用。

背景技术

四环素是一种广谱抗菌素，可以与很多药物或饲料添加剂混合使用，所以，四环素已被广泛用于畜禽养殖和水产养殖中。然而，四环素等抗生素的过量使用在肉制品和海鲜产品中已造成了严重的药物残留，成为危害人类身体健康的食品安全隐患，长期摄入含抗生素的食品，可在体内造成药物积累，达到一定浓度后，会对人体健康产生危害，如增强细菌耐药性、破坏胃肠道菌群平衡，从而降低人体免疫力。我国规定了牛奶中四环素、土霉素、金霉素的残留限量为100μg/L。

目前，国内外对四环素进行定性、定量检测比较经典的方法有液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)，这些方法虽然准确性高，但仪器价格昂贵，且前处理过程复杂，分析速度慢，专业性要求较高，不适用于大批量样品或现场快速检测。此外，还有常用的酶联免疫法(ELISA)，电化学分析法。酶联免疫法可以一次性处理多个样品，灵敏度高但需要操作者具有较高的专业知识，不利于普及使用。化学发光法容易实现自动化，但对环境要求较高不利于现场使用。

与之相比，免疫层析法稳定性好、操作简单、无需其它仪器设备且检测速度快、结果直观可靠，适用于现场快速检测。然而，传统的基于胶体金的试纸条，其低灵敏度仍然阻碍了它们的广泛应用，特别是在痕量分析中。

发明内容

针对现有技术中的缺陷和不足，本发明提供一种探针、检测四环素的方法及应用，解决免疫层析检测低灵敏度的技术问题。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案包括：

一种探针，包括信号载体和四环素抗体，信号载体为金属多巴胺框架，所述的金属多巴胺框架的粒径为250～300nm。

具体地，制备该探针的方法包括制备金属多巴胺框架，然后将金属多巴胺框架与四环素抗体结合即得。

进一步地，制备该探针的方法包括：

(1)制备金属多巴胺框架：包括制备金属有机框架ZIF-67，然后将金属有机框架ZIF-67分散于乙醇-水溶液中，加入盐酸多巴胺搅拌反应制得金属多巴胺框架；

(2)制备探针：将金属多巴胺框架溶液与四环素抗体混合，加入缓冲液搅拌反应制得。

进一步地，所述的步骤(1)中，金属有机框架ZIF-67与盐酸多巴胺的质量比为(2～3):1。

进一步地，所述的步骤(2)中，金属多巴胺框架溶液与四环素抗体的体积比为(100～130)：1。

一种检测四环素的方法，检测方法包括向待检测物中加入本发明所述的探针后，然后将检测四环素的试纸条插入上述混合液中进行检测。

具体地，所述的检测四环素的试纸条包括底板，底板上依次贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的硝酸纤维素膜上沿横向设置检测线和质控线，所述检测线上喷涂有四环素抗原，所述质控线上喷涂有羊抗鼠单克隆抗体。

进一步地，检测线上喷涂有四环素抗原的制备方法包括：1mg/mL四环素抗原包被溶液以1μL/cm的划线速率喷涂在检测线上得检测线；