[发明专利]原花青素SA水凝胶在制备治疗肌腱异位钙化药物方面的应用

说明书

本发明公开了原花青素在肌腱病的病理微环境中调控干细胞功能的应用，并提供原花青素SA水凝胶的制备方法和原花青素SA水凝胶治疗肌腱异位钙化的应用。基于本发明的应用，发明并证明了在肌腱干/祖细胞中加入原花青素不会影响细胞增殖，同时可有效抑制肌腱干/祖细胞的钙沉积的作用以及后续对肌腱病的治疗潜力。通过Micro CT、苏木精‑伊红染色、番红‑固绿染色、胶原II、骨钙素(OCN)免疫组织化学染色检测原花青素SA水凝胶治疗肌腱异位钙化情况，发现并证明了原花青素SA水凝胶可有效抑制肌腱异位钙化。同时缓释给药的给药途径，可以在提高局部药物浓度的同时减少全身用药产生相应的副作用，具有临床应用前景。

技术领域

本发明涉及原花青素的新应用，具体涉及原花青素在肌腱病的病理微环境中调控干细胞功能的应用。提供原花青素SA水凝胶的制备方法，并明确了原花青素SA水凝胶在制备治疗肌腱异位钙化药物方面的应用。

背景技术

肌腱是人体重要组织，肌腱病是一种常见的肌肉骨骼系统疾病。长期过度负重和肌腱微撕裂后，肌腱只能瘢痕修复，无法重建力学结构，再断裂发生率高。目前缺乏有效的治疗手段，其发病机理尚不清楚，这阻碍了肌腱病有效治疗药物的研发。在肌腱病的炎症环境下，肌腱干细胞向骨软骨系错误分化，晚期造成肌腱异位钙化。因此肌腱干细胞异常分化是肌腱病发生发展的原因之一，针对肌腱干细胞的表型维持和腱系诱导分化，提高肌腱的再生能力，有望为肌腱病提供新的治疗方向。

原花青素(Procyanidin，PC)是一种具有交联能力的生物多酚，广泛存在于水果，蔬菜，种子，坚果，花，树皮中，没有急性和亚急性毒性，有极强的消除自由基、抗氧化、抗炎、抗过敏、抗癌、抗菌、抗病毒、血管扩张的作用。

药物缓释是一种控制药物的释放速度和释放方向的技术，水凝胶经常应用于该领域当中，水凝胶是以水为分散介质的凝胶，具有交联结构的水溶性高分子中引入一部分疏水基团而形成能遇水膨胀的交联聚合物。使药物能够以想要的浓度和释放速度在一定时间内作用在机体病变位置，可减少用药次数、提高药物利用率、减少全身性毒性等。

发明内容

本发明的目的在于提供原花青素类化合物在肌腱病的病理微环境中调控干细胞功能的应用和原花青素SA水凝胶治疗肌腱异位钙化的应用。本发明研究发现通过CCK-8检测用2，4，6，8ug/ml的原花青素培养肌腱干/祖细胞，不会影响细胞的增殖。通过碱性磷酸酶染色和茜素红染色，观察到6ug/ml和8ug/ml的原花青素可有效抑制肌腱干/祖细胞的钙沉积，发现并证明了原花青素对肌腱干/祖细胞的作用以及对肌腱病的治疗潜力。

提供原花青素SA水凝胶的制备方法，通过Micro CT、苏木精-伊红染色、番红-固绿染色、胶原II、骨钙素(OCN)免疫组织化学染色检测原花青素SA水凝胶治疗肌腱异位钙化情况，发现并证明了原花青素SA水凝胶可有效抑制肌腱异位钙化。

具体地，本发明首先提供了原花青素在制备治疗肌腱异位钙化药物方面的应用。

其中，所述原花青素通过抑制肌腱干/祖细胞的钙沉积而发挥作用。同时，所述原花青素对抑制肌腱干/祖细胞增殖无明显抑制作用。

其中，所述原花青素对肌腱细胞软骨、骨分化相关基因和蛋白的表达具有抑制作用，具体包括对胶原II和骨钙素(OCN)的表达具有抑制作用。

其中，所述原花青素的有效治疗浓度为2ug/ml～8ug/ml，优选为6ug/ml～8ug/ml。

其中，所述原花青素优选地以原花青素SA水凝胶(PC+hydrogel)的形式应用。

其中，所述原花青素SA水凝胶的释放规律复合一阶线性释放规律，7天释放比例大于80％。