[发明专利]具有改善的凝乳性质的凝乳酶变体

权利要求书

1.一种制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其包括以下步骤：

(a)：在具有凝乳酶活性的亲本多肽中的一个或多个位置制造改变，其中所述改变包含对应于位置117、134、141、143、156、241、279、280、281、298、300、307、309、311、325、350、352及353中任一个位置的至少一个氨基酸位置的置换、缺失或插入；以及

(b)：制备并分离步骤(a)中改变的多肽，从而得到分离的凝乳酶多肽变体，其中所述变体具有凝乳酶活性；

以及其中：

(i)：所述亲本多肽的氨基酸位置是通过使该亲本多肽与SEQ ID NO:1(牛凝乳酶)的多肽的比对确定的——即，SEQ ID NO:1的多肽用于确定所述亲本多肽中对应的氨基酸序列；以及

(ii)：所述亲本多肽具有与SEQ ID NO:2的成熟多肽至少90％序列同一性，所述成熟多肽是从SEQ ID NO:2的氨基酸位置59到氨基酸位置381。

2.一种制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其包括以下步骤：

(a)：在具有凝乳酶活性的亲本多肽中的一个或多个位置制造改变，其中所述改变包含对应于位置134的至少一个氨基酸位置的置换、缺失或插入；以及

(b)：制备并分离步骤(a)中改变的多肽，从而得到分离的凝乳酶多肽变体，其中所述变体具有凝乳酶活性；

以及其中：

(i)：所述亲本多肽的氨基酸位置是通过使该亲本多肽与SEQ ID NO:1(牛凝乳酶)的多肽的比对确定的——即，SEQ ID NO:1的多肽用于确定所述亲本多肽中对应的氨基酸序列；以及

(ii)：所述亲本多肽具有与SEQ ID NO:2的成熟多肽至少90％序列同一性，所述成熟多肽是从SEQ ID NO:2的氨基酸位置59到氨基酸位置381。

3.如权利要求1或2所述的制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其中所述的分离的凝乳酶多肽变体具有：

产生比包含SEQ ID NO:2的成熟多肽的骆驼凝乳酶的C/P比更高的C/P比的凝乳酶活性。

4.如权利要求1-3中任一项所述的制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其中所述亲本多肽是野生型哺乳动物凝乳酶。

5.如权利要求4所述的制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其中所述的分离的牛凝乳酶多肽变体包含与SEQ ID NO:2的成熟多肽相比少于10个或不多于5个氨基酸改变。

6.如权利要求5所述的制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其中在具有凝乳酶活性的所述亲本多肽的高变区中的一个或多个位置制造所述改变。

7.如权利要求1所述的制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其中所述改变包含至少一个氨基酸位置的置换以及其中所述置换为134Q、141E、143F、280I、281V、298E、300R、307D、309D、309W、311I、352L、352Q、353L或353Q。

8.如权利要求7所述的制备分离的凝乳酶多肽变体的方法，其中所述置换为H134Q、Q141E、I143F、L280I、F281V、Q298E、Q300R、N307D、G309D、G309W、L311I、Q352L、E352L、E352Q、K353L或K353Q。