[发明专利]一种细胞组分自动提取方法

说明书

本发明属于本发明涉及生物技术领域，公开了一种细胞组分自动提取方法，包括如下步骤：（1）将细胞样本和致敏剂混合后加入加样槽孵育；（2）在孵育5‑10min后，移液器将样品加到滤管中；（3）喷气加压，细胞在剪切力和惯性冲击作用下破碎；（4）如需收集细胞总蛋白或某种亚细胞结构特殊分布的蛋白，可将步骤（3）所得产物先进行预处理再将系列细胞组分抽提液加入到过滤产物中进行抽提。该方法有别于传统方法中完全依靠裂解液的化学破碎，或者研磨匀浆法破碎，使细胞破碎更均一，效率高，蛋白破坏小。该方法即适用于样本数少的处理，也适用于样本总数量大的情况下的批处理，对单个样品量需求少，可有效节省人力，避免人力操作的差异性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种可自动分离动植物细胞中蛋白和亚细胞结构的装置和方法，适用于多样品批处理。

背景技术

在后基因组时代，开展功能组学的研究是生命科学研究的主要内容，蛋白质是生命活动的主要执行者，因此是研究的重点。通过分析不同生理/病理条件下，组织、细胞或亚细胞结构中蛋白质的异同，以揭示复杂的生命现象，为疾病诊治寻找靶点。由于一个细胞内蛋白质种类繁多（超过10万种），不同蛋白的动态分布范围极广（从10²到10⁹个分子），且性质各异，这些因素为蛋白质的分离分析带来困难。采取一些预分离手段使蛋白与非蛋白的生物大分子分离，减少样品复杂性，是对特异蛋白质进行分析研究的基本方法。随着生命科学研究的深入和精细化，已进入对亚细胞结构特异性分布的蛋白质进行研究的阶段，因此分离出亚细胞特异分布的蛋白是亚细胞蛋白质组学研究的前提。

传统分离细胞蛋白的方法是采用RIPA裂解液（主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1%脱氧胆酸钠，0.1% SDS）裂解细胞，蛋白溶解到裂解液中，通过离心机高速离心，丢弃不溶部分，上清液即为分离得到的蛋白溶液，能够被该方法分离的蛋白必须能够被细胞裂解液溶解，事实上约有30%的蛋白是不溶于RIPA裂解液的，这部分蛋白存在于离心沉淀中被丢弃，由此造成目标蛋白丢失或者蛋白定量不准。经典的分离亚细胞结构的方法是对细胞裂解匀浆以后，以差速离心结合密度梯度离心进行分离，该方法需要配置复制的密度梯度介质，需要超高速离心机，因此对研究人员的实验技能和实验设备要求高，且操作繁琐，样本量需求大，耗时长，重复性差。近年相继出现一些基于抗体亲和法亚细胞分离方法，该方法利用免疫亲和的专一性，因此需要为每种结构制备专门的抗体，虽然专一性得到提高，但抗体价格高昂，实验成本过高。同时由于传统法中大量使用RIPA进行细胞裂解和蛋白溶解，所含的SDS等阴离子表面活性剂虽然能高效裂解，但是也会造成蛋白的丢失变性。传统物理破碎细胞的手段为超声或玻璃匀浆器匀浆，超声法不适用于样品量少的科学研究，且超声的热效应会导致蛋白变性；匀浆效果人为随机性大，容易出现匀浆效果不够或过分匀浆，破坏亚细胞结构，影响下游分离。同时手工操作匀浆，难以保证全程低温环境，造成蛋白变性或降解。同时释放的基因组核酸会使细胞匀浆液极为粘稠，影响进一步的分离实验。

在传统方法中，低温高速离心甚至是超高速离心是必要的分离方法，离心操作需要人工完成样品放置和回收，不适合与其它操作环节进行整合实现自动化，因此目前尚无细胞蛋白自动提取装置。在多样本分离提取的要求下，人工操作工作强度大，批件差异性风险提高，势必影响实验结果的科学性，因此有必要进行技术革新，开发自动提取装置。

发明内容

为克服离心操作的不足，本发明提供了一种细胞组分自动过滤提取方法，该方法有别于传统方法中完全依靠裂解液的化学破碎，或者研磨匀浆法破碎，使细胞破碎更均一。该方法即适用于样本数少的处理，更适用于样本总数量大的情况下的批处理，对单个样品量需求少，处理效率高，可有效节省人力，避免人力操作的差异性。

本发明目的是由以下技术方案实现的：

一种细胞组分自动提取方法，该方法所用仪器包括细胞组分自动提取装置，所用试剂包括致敏剂、系列细胞蛋白抽提液；