[发明专利]一种高效处理化工废水的复合菌剂制备及应用方法

权利要求书

1.一种高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，包括：

步骤1：对污泥样品进行菌种分离，并进行单菌落划线培养；

步骤2：对上述单菌落进行16s rDNAPCR扩增，测序并得出相应菌落名称；

步骤3：对上述得到的株菌进行扩大培养，所用培养基为LB液体培养基，并保存备用；

步骤4：然后进行单菌株降解效果测定，选取降解效果最好的菌株；

步骤5：挑取出降解效果最好的菌株作为Ⅰ组，然后将Ⅰ组与其它株菌分别搭配，进行实验，选出降解效果最好的组合作为Ⅱ组；再将Ⅱ组与其株菌搭配，得到降解效果最好的Ⅲ组；依此类推，直到后一组的降解率不再大于前一组时，得到的最优组合即为复合菌剂。

2.根据权利要求1所述的高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤1包括：

11)配制原水固体培养基，蒸汽灭菌后放入洁净操作台，倒平板；

12)将现场取得的污泥样品进行稀释，稀释倍数为10^-6；

13)用已灭菌的涂布棒将稀释后污泥样品涂平板，将培养皿倒置放入生化培养箱，32℃，培养72h；

14)将培养皿取出，观察菌落生长状况，进行单菌落划线培养。

3.根据权利要求2所述的高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，所述原水固体培养基由1L污水，10gNaCl和15-20g/L的琼脂组成；所述污水中COD为800-1200mg/L。

4.根据权利要求1所述的高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤2中，16s rDNA PCR扩增所用引物为27F：5’-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’和1492R：5’-GGC TAC CTT GTT ACG ACT T-3’；

所述16s rDNA PCR扩增体系共为50μL，包括ddH₂O19μL、步骤2得到的菌株25μL，引物各2μL，DNA模板2μL。

5.根据权利要求1所述的高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤3中，所述LB液体培养基为胰蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，酵母提取物5g/L，加去离子水至1L。

6.根据权利要求1所述的高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤3中，保存条件为：将经过蒸汽灭菌浓度为80％的甘油与菌液等体积混合，放于-20℃冰箱中保存。

7.根据权利要求1所述的高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤4具体为：将煤化工废水灭菌，取100ml放于250ml锥形瓶中，加10ml菌液，在32℃振荡培养箱中培养72h，测定其降解效果。

8.根据权利要求7所述的高效处理化工废水的复合菌剂制备方法，其特征在于，所述菌液为离心去除培养液后，将菌沉淀放入盛有污水的锥形瓶。

9.一种高效处理化工废水的复合菌剂应用方法，其特征在于，将权利要求1-8任一所述的复合菌剂离心后，先与部分化工废水中的泥水混合物振荡混合，再倒入SBR反应器中。

10.根据权利要求9所述的高效处理化工废水的复合菌剂应用方法，其特征在于，所述复合菌剂中活菌数为10⁸-10⁹CFU/mL，所述复合菌剂用量为化工废水体积百分比的2-6％。