[发明专利]调节性T细胞在制备治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠药物方面的应用

说明书

本发明提供调节性T细胞在制备治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠药物方面的应用。本发明另外还提供一种药物治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠效果的验证方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)建立Zika病毒感染孕鼠模型；(2)检测孕鼠模型的Zika病毒量；(3)病毒空斑试验过程；(4)Smad2及Smad4过表达质粒电转EL4细胞；(5)Western blot分析过程；(6)流式细胞仪分选CD4⁺CD25⁺T细胞；(7)调节性T细胞过继转移实验过程。本发明提出了用调节性T细胞制备治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠，同时通过孕鼠验证了调节性T细胞在解决Zika病毒感染所致不良妊娠方面的作用，有望在未来解决目前Zika病毒感染所致不良妊娠无法治疗的问题。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及调节性T细胞在制备治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠药物方面的应用及其药效验证方法。

背景技术

Zika病毒(ZIKV)是一种通过蚊虫进行传播的虫媒病毒。但与大多数虫媒病毒不同，Zika病毒能直接感染和(或)穿过胎盘屏障，导致组织特异性的损伤。妊娠期妇女感染Zika病毒，会导致胎儿发育异常，包括自发性流产，胎儿宫内发育迟缓及小头畸形。妊娠是属于特殊的免疫耐受的状态。调节性T细胞(T Regulatory cells,Tregs)作为特殊的T细胞亚群，在维持免疫稳态中发挥重要的作用，参与妊娠期免疫耐受的形成。但是，目前的技术，关于调节性T细胞在治疗Zika病毒感染所致不良妊娠中的用途没有得到有效开拓，是本领域长期以来一直研究的课题。

发明内容

本发明提供调节性T细胞在制备治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠药物方面的应用及其药效验证方法，以解决背景技术中所提出的问题。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供调节性T细胞在制备治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠药物方面的应用。

进一步的，所述治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠药物至少包括调节性T细胞。

本发明的实施例另外还提供一种药物治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠效果的验证方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)建立Zika病毒感染孕鼠模型；(2)检测孕鼠模型的Zika病毒量；(3)病毒空斑试验过程；(4)Smad2及Smad4过表达质粒电转EL4细胞；(5)Western blot分析过程；(6)流式细胞仪分选CD4⁺CD25⁺T细胞；(7)调节性T细胞过继转移实验过程。

进一步的，药物治疗或预防Zika病毒感染所致不良妊娠效果的验证方法，具体包括以下步骤：

(1)建立Zika病毒感染孕鼠模型，观察脾脏及胎盘中Tregs的变化

(1-1)建立Zika病毒感染孕鼠模型，IFNAR^-/-孕鼠在孕中期(E10.5)感染Zika病毒；

(1-2)监测孕鼠体重的变化，观察孕鼠的流产率、胎鼠的体重和胎鼠的大小，观察脾脏及胎盘中Tregs数量的变化；

(2)检测Zika病毒量

(2-1)收集组织或细胞，取适当重量的组织或细胞加入Trizol裂解，提取RNA，用逆转录试剂盒，以Oligo(dT)18逆转录为cDNA，-80℃冻存；

(2-2)Zika病毒：forward，5’-CCGCTGCCCAACACAAG-3’；reverse，5’-CCACTAACGTTCTTTTGCAGACAT-3’；探针，5’-/56-FAM/AGCCTACCT/ZEN/TGACAAGCAATCAGACACTCAA/3IABkFQ/-3’；