[发明专利]一种三唑磷单克隆抗体及其在胶体金检测试纸的应用

说明书

本发明涉及一种三唑磷单克隆抗体，其特征在于：其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；一种三唑磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用，该胶体金检测试纸包括衬板和依次排列在衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫内吸附有三唑磷金标抗体，所述纤维素膜上有检测线和对照线，所述检测线用三唑磷半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，且所述载体蛋白溶液中所采用的载体蛋白是利用活泼酯法将O‑乙基‑O‑(1‑苯基‑1,2,4‑三唑‑3‑基)‑N‑(丁酸基)硫代磷酸酯与牛血清白蛋白(BSA)偶联制得，所述对照线用兔抗鼠IgG抗体印制；本发明特异性强，敏感性高；检测简便快速；结果显示形象、直观、准确；节省费用，适用范围广，便于推广。

技术领域

本发明涉及农药检测领域，具体涉及一种三唑磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用。

背景技术

三唑磷(Triazophos)属于有机磷杀虫剂，主要用于防治果树、棉花、粮食类作物上的鳞翅目害虫、害螨、蝇类幼虫及地下害虫等。其作用机理是抑制乙酰胆碱酯酶的活性。乙酰胆碱是神经递质，过量的乙酰胆碱过度刺激乙酰胆碱受体，导致靶生物死亡。然而，三唑磷的残留也会使一些不是预定目标的生物遭到毒害。

目前，对三唑磷残留的检测方法主要是仪器分析方法，包括气相色谱法(Gaschromatography，GC)、气相色谱-质谱串联法(GC-MS)等。这些方法结果可靠，灵敏度高，已有相关的技术标准可供参考。但由于需要昂贵的仪器、专门的操作人员，以及样品前处理复杂、成本高、时间长，因此不能更好地满足快速简便的现场检测要求。

与仪器分析方法相比，免疫检测方法因其简便、经济、快速等优点而在农药残留检测领域中受到越来越多的关注。ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法是常用的免疫检测方法，但是其却有操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观，不能在线进行检测等缺陷。因而ELISA在三唑磷的快速检测上的应用受到很大的限制。胶体金试纸条无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟即可判定结果，不仅操作简便、快速，且结果直观准确、成本低。

发明内容

本发明目的是：提供一种三唑磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用。

本发明的技术方案是：一种三唑磷单克隆抗体，其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供了一种三唑磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用，该胶体金检测试纸包括衬板和依次排列在衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫内吸附有三唑磷金标抗体，所述纤维素膜上有检测线和对照线，所述检测线用三唑磷半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，且所述载体蛋白溶液中所采用的载体蛋白是利用活泼酯法将O-乙基-O-(1-苯基-1,2,4-三唑-3-基)-N-(丁酸基)硫代磷酸酯与牛血清白蛋白(BSA)偶联制得，所述对照线用兔抗鼠IgG抗体印制。

进一步的：所述衬板为不吸水的韧性材料，所述的韧性材料为硬质塑胶条或不吸水硬纸条，所述吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。

进一步的：所述样品垫为玻璃纤维棉垫和/或尼龙膜垫和/或聚偏二氟乙烯膜垫和/或聚酯膜垫，所述纤维素膜为硝酸纤维素膜和/或纯纤维素膜和/或羧化纤维素膜。

进一步的：所述吸水垫上设有手柄端保护膜，所述样品垫上设有样品浸入端保护膜，所述手柄端保护膜和样品浸入端保护膜均为不透明的胶膜。

上述应用三唑磷单克隆抗体的胶体金检测试纸的制备方法包括以下步骤：

1)三唑磷半抗原的合成；

2)三唑磷半抗原与载体蛋白偶联得到三唑磷半抗原偶联的载体蛋白溶液；

3)三唑磷金标抗体的制备；