[发明专利]一种检测大豆生物钟基因ELF3同源基因的表达量的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测大豆生物钟基因ELF3同源基因的表达量的试剂盒。其包括用于扩增Glyma.04G050200基因的引物对200、用于扩增Glyma.08G197500基因的引物对500、用于扩增Glyma.14G091900基因的引物对900和用于扩增Glyma.17G231600基因的引物对600；引物对200、引物对500、引物对900和引物对600的上下游引物依次如SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：10所示。实验证明，采用引物对200、引物对500、引物对900和引物对600进行实时定量PCR，可以获得相应基因的表达量，进而分析大豆的生物节律和生长习性。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测大豆生物钟基因ELF3同源基因的表达量的试剂盒。

背景技术

实时定量PCR技术可以方便快捷的评价目标基因表达水平，是分子生物学和分子遗传育种领域的广泛使用的重要分析工具。然而，它对目标基因引物设计的专一性特异性的要求高，这成为目标基因表达水平精准分析的限制性因素。尤其是在基因组同源基因拷贝数较多的情况下，获得有效区分各个同源基因的特异性引物至关重要。

大豆是典型的短日照作物，也是植物光周期反应研究的模式材料，更是世界上最为重要的油料作物和高蛋白粮食作物。在我国，大豆是四大粮食作物之一，对保证国家粮食安全、改善城乡人民生活和增加农民收入有十分重要的作用。同时，大豆是古四倍体生物，历史上发生多次基因组复制事件，导致同源基因拷贝数多，相似性较高。因此，在分析大豆基因表达水平时，特别需要关注引物的特异性和有效性问题。

外部环境时刻在变化，最为直观显著的是昼夜更替与四季变化，及与之密切相关的温度波动。生物适应这种外界的波动，发展了一套追随时间的内在机制，即生物节律钟。生物节律钟通常包括三个部分：信号输入途径、节律振荡子和信号输出途径。信号输入途径感知外部环境信号的周期性波动如光照与温度的昼夜变化，传递给节律振荡子，调节生物节律钟的节律，输出节律信号到信号输出途径，调节目标基因、蛋白和代谢产物，从而使生物更好地适应外界环境。因此，与昼夜更替周期相一致，生物节律钟大体保持24h的周期。生物节律钟往往由多个基因/蛋白构成，形成多个互锁的转录翻译反馈环路，其中ELF3是其中一个重要的核心组分。

发明内容

本发明的目的是检测大豆生物钟基因ELF3同源基因的表达量，大豆生物钟基因ELF3的同源基因包括Glyma.04G050200基因(Genebank号为100793561)、Glyma.08G197500基因(Genebank号为100820110)、Glyma.14G091900基因(Genebank号为100818279)和Glyma.17G231600基因(Genebank号为100788038)。

本发明首先保护一种试剂盒，可包括用于扩增Glyma.04G050200基因的引物对200、用于扩增Glyma.08G197500基因的引物对500、用于扩增Glyma.14G091900基因的引物对900和用于扩增Glyma.17G231600基因的引物对600；Glyma.04G050200基因、Glyma.08G197500基因、Glyma.14G091900基因和Glyma.17G231600基因均为大豆生物钟基因ELF3的同源基因；

所述引物对200可由用于扩增特异DNA片段1的两条引物组成；所述特异DNA片段1中具有大豆基因组中引物200-F和引物200-R组成的引物对的靶序列；

所述引物200-F的核苷酸序列可如SEQ ID NO：3所示；

所述引物200-R的核苷酸序列可如SEQ ID NO：4所示；

所述引物对500可由用于扩增特异DNA片段2的两条引物组成；所述特异DNA片段2中具有大豆基因组中引物500-F和引物500-R组成的引物对的靶序列；

所述引物500-F的核苷酸序列可如SEQ ID NO：5所示；