[发明专利]一种三甲基吡嗪残留的检测方法

说明书

本发明公开了一种三甲基吡嗪残留的检测方法，包括：利用无水乙醇提取待测样品中的三甲基吡嗪，制备待测溶液；使用气相色谱对待测溶液进行检测；基于检测结果计算所述待测样品中三甲基吡嗪的残留量。本发明所述的三甲基吡嗪残留的检测方法操作简单，响应灵敏，能够用于检测透明质酸中微量的三甲基吡嗪残留。

技术领域

本申请涉及透明质酸的检测领域，且更为具体地涉及一种三甲基吡嗪残留的检测方法。

背景技术

透明质酸(Hyaluronic acid，简称HA)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酸氨基-2-脱氧-D-葡萄糖(1-4)-D-D-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖。1934年由Meyer等人从牛玻璃球眼中首次提取获得。

透明质酸由于拥有独特的分子结构和理化性质因此在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，由于HA具有良好的保湿性、粘弹性、渗透性和延展性，同时无任何免疫原性和毒性，被广泛应用于化妆品、食品、医药和临床治疗等行业领域。

透明质酸因为本来就存在皮肤中，作为天然的保湿因子有很强的保湿效果，透明质酸在化妆品、医药等领域的应用也越来越广泛，比如作为眼用制剂的媒介广泛应用于眼用制剂中，也是皮下填充注射的热门材料。

透明质酸在发酵过程中会由美拉德反应生成少量三甲基吡嗪，由于三甲基吡嗪具有烤土豆、炒花生、核桃、坚果、壤香、发酵霉香的香气，风味阈值低且具有一定的毒性，在应用透明质酸时为了良好地表现其特性以及对人体的安全性，需要保证其纯度和质量。

目前，有关吡嗪类化合物的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气质(GC-MS)和气质离子扫描联用法(GC-MS-SIM)。例如在专利文献1中公开了一种烟气中吡嗪类化合物的检测方法，其中使用的是气相色谱-质谱联用检测。另外，目前国家标准GB 1886.292-2016(食品安全国家标准食品添加剂2,3,5-三甲基吡嗪)中只规定了三甲基吡嗪原料的纯度测定方法，未涉及某产品中三甲基吡嗪残留的测定方法。

专利文献

专利文献1:CN 105842374 A。

发明内容

如上所述，透明质酸在应用于医美和医疗器械领域时例如应用于面膜、皮下注射和眼科手术等领域时，非常少量的杂质混入都会对终端产品的安全性以及产品质量带来很大风险。并且由于三甲基吡嗪具有烤土豆、炒花生、核桃、坚果、壤香、发酵霉香的香气，风味阈值低且具有一定的毒性，因此微量的三甲基吡嗪在透明质酸中的检测是非常有必要的。为了解决上述技术问题，提出了本申请。本发明根据透明质酸和三甲基吡嗪的溶解特性，开发了一种适合检测透明质酸中三甲基吡嗪的方法，本方法操作简单，检测成本低，准确度高，检测限可达到0.4ppm。

透明质酸中的三甲基吡嗪是在透明质酸发酵生产过程中由美拉德反应生成，经干燥吸附于透明质酸中，被测的透明质酸中三甲基吡嗪的含量很少，其通常含量估算在0.1～2.0mg/kg范围之间，在这样的低含量条件下，无法简单通过对透明质酸进行加热的方式来测试试样中的三甲基吡嗪。如果高于0.4ppm的检测限会造成测量结果出现较大偏差甚至无法测出。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

本发明提供一种三甲基吡嗪残留的检测方法，包括：

利用无水乙醇提取待测样品中的三甲基吡嗪，制备待测溶液；

使用气相色谱对待测溶液进行检测；

基于检测结果计算所述待测样品中三甲基吡嗪的残留量。

在一个具体实施方式中，所述三甲基吡嗪为2,3,5-三甲基吡嗪。