[发明专利]一株连续传代的飞蝗细胞系QAU-Lm-E-17及其制备方法和应用

权利要求书

1.一株连续传代的飞蝗(Locusta migratoria)细胞系QAU-Lm-E-17，其特征在于，于2019年6月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No.C2019123。

2.权利要求1所述飞蝗细胞系QAU-Lm-E-17的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将消毒后的飞蝗卵冲洗后研磨，磨碎卵粒提取细胞滤液，将所述细胞滤液加入培养基中进行培养，在所述培养期间每隔14d换一半体积的新鲜培养基；所述培养基以TNM-FH培养基为基本培养基，还包括以下体积百分含量的组分：20％的胎牛血清、0.1％的海藻糖和0.01％的庆大霉素。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述飞蝗卵为飞蝗产卵7～13d的卵块。

4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述消毒包括依次进行的次氯酸钠消毒和酒精消毒；所述次氯酸钠消毒为利用体积百分含量为10％的次氯酸钠水溶液消毒5min；所述酒精消毒为利用体积百分含量为75％酒精水溶液消毒5min。

5.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述研磨为在过滤网上进行，所述过滤网的孔径为100μm。

6.权利要求1所述飞蝗细胞系QAU-Lm-E-17或利用权利要求2～5任一项所述制备方法制备得到的飞蝗细胞系QAU-Lm-E-17在离体增殖蝗虫微孢子虫中的应用。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述离体增殖蝗虫微孢子虫的方法，包括以下步骤：将感染微孢子虫的飞蝗若虫，进行表面消毒后，解剖所述蝗虫若虫提取脂肪体，将所述脂肪体在第二过滤网上研磨后收集脂肪体滤液，利用所述脂肪体滤液接种所述飞蝗细胞系QAU-Lm-E-17后，在28℃的条件下进行培养；

所述第二过滤网浸泡于增殖培养基中，所述增殖培养基以TNM-FH培养基为基本培养基，还包括以下体积百分含量的组分：20％的胎牛血清、0.1％的海藻糖、0.01％的庆大霉素和0.025％的两性霉素B；

所述第二过滤网的孔径为40μm。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述飞蝗若虫为感染微孢子虫10d后的3龄飞蝗若虫，解剖前饥饿24h。

9.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述表面消毒包括依次进行的次氯酸钠消毒和酒精消毒；所述次氯酸钠消毒为利用体积百分含量为10％的次氯酸钠水溶液消毒10min；所述酒精消毒为利用体积百分含量为75％酒精水溶液消毒10min。

10.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述接种时，微孢子虫的孢子和所述飞蝗细胞系QAU-Lm-E-17中细胞的数量比为20:1。