[发明专利]对柑橘大实蝇成虫具有行为反应的柑橘幼果挥发物的测试方法

权利要求书

1.一种对柑橘大实蝇成虫具有作用的柑橘幼果挥发物的测试方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、测试前准备：味源瓶先后用蒸馏水、无水酒精、正己烷淋洗，随后放入200℃烘箱烘烤2h进行预处理，再用Parafilm封口膜密封味源瓶瓶口后，200mL/min气流持续通入空气；

步骤二、挥发物收集：将500克新鲜柑橘幼青果放置于步骤一中预处理后的味源瓶(4)中，味源瓶(4)的顶部与吸附管(5)连接，吸附管(5)中放置有Porapak-Q吸附剂，吸附管(5)通过连接管与大气采样器(6)连接，味源瓶(4)的底部还通过连接管依次连接有流量计(3)、活性炭过滤管(2)和空气泵(1)，打开空气泵(1)的气泵和大气采样器(6)，控制空气流速为500mL/min，大气采样器(6)以流量为500mL/min的速率进行连续抽气，此时吸附管(5)中的Porapak-Q吸附剂持续吸附柑橘幼青果的挥发物，吸附时间持续12h，然后将吸附有挥发物的Porapak-Q吸附剂采用1mL二氯甲烷洗脱，并在-20℃的条件下冻存保存；

或者，将500克新鲜柑橘幼青果放置于步骤一中预处理后的味源瓶(4)中，味源瓶(4)的顶部与固相微萃取SPME萃取头连接，味源瓶(4)的底部还通过连接管依次连接有流量计(3)、活性炭过滤管(2)和空气泵(1)，打开空气泵(1)，控制空气流速为200mL/min，此时SPME萃取头持续吸附柑橘青果的挥发物，通气时间持续30min；

步骤三、挥发物成分检测和确定对柑橘大实蝇成虫具有行为反应的成分：将柑橘大实蝇成虫的触角剪切下，并连接到玻璃电极上，采用气相色谱-触角电位测试系统鉴定出柑橘幼青果的挥发物中的各个成分，并鉴定出了对柑橘大实蝇成虫具有行为反应的挥发物中的柠檬烯、4-萜烯醇、壬醛和柠檬醛，其中雄柑橘大实蝇成虫对柠檬烯、4-萜烯醇和柠檬醛均有作用，雌柑橘大实蝇成虫对柠檬烯和壬醛均有作用。

2.根据权利要求1所述的一种对柑橘大实蝇成虫具有作用的柑橘幼果挥发物的测试方法，其特征在于，采用气相色谱-质谱联用仪对步骤三中鉴定的柑橘挥发物进行验证鉴定，设置后进样口温度250℃，前进样口温度260℃，采用不分流进样模式；载气为高纯氦气，高纯氦气的质量纯度为99.999％，载气流速为每分钟1mL，柱头压为1.45psi；起始色谱柱温度40℃保持2分钟，再以8℃/min升至260℃保持1分钟；

质谱条件：接口温度和离子源温度均为280℃，质量扫描范围45m/z～500m/z，扫描速率为5scans/s，离子化方式为EI，电子能量为70eV，发射电流为25μA。

3.根据权利要求1所述的一种对柑橘大实蝇成虫具有作用的柑橘幼果挥发物的测试方法，其特征在于，采用触角电位仪验证柠檬烯、4-萜烯醇、壬醛和柠檬醛对柑橘大实蝇成虫的行为反应；具体过程为：选择柠檬烯、4-萜烯醇、壬醛和柠檬醛的标准样品在同一根触角上重复测试3次，连续测试5根触角，测试的室内温度为23℃～27℃，湿度为60％RH～80％RH。