[发明专利]检测试剂、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测试剂，其特征在于包括如下四个引物对中的任意一种或多种的组合，所述四个引物对包括：

第一引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示的第一引物、第二引物；

第二引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示的第三引物、第四引物；

第三引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示的第五引物、第六引物；

第四引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示的第七引物、第八引物。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于：至少一个引物对所含的至少一个引物的5’端还具有核酸标记物，所述核酸标记物均包括FITC、FAM、HEX、TET、TAMRA、ROX、VIC、NED、Alexa Flour、生物素、地高辛、cy3、cy5中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于：每一引物对所含的两个引物的5’端均具有所述核酸标记物。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测试剂，其特征在于还包括PCR常规组件。

5.一种试剂盒，其特征在于包括如权利要求1-4中任一项所述的检测试剂以及核酸免疫层析试纸条，所述核酸免疫层析试纸条包括底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测带和质控带。

6.根据权利要5所述的试剂盒，其特征在于：所述金标垫上附有由第一抗体和有色颗粒形成的复合物，所述检测带上设置有第二抗体，所述质控带上设置有第三抗体；其中，所述第一抗体为所述核酸标记物的抗体，所述第二抗体为所述酸标记物的抗体或配体；所述第三抗体为能够结合指定种属来源抗体的抗体。

7.根据权利要6所述的试剂盒，其特征在于：所述第三抗体为羊抗鼠多抗，所述有色颗粒为经异硫氰酸荧光素抗体标记的球形红色胶体金颗粒。

8.如权利要求1-4中任一项所述的检测试剂或者权利要求5-7中任一项所述试剂盒于制备检测致病菌的产品中的应用。

9.一种应用于致病菌检测方法的产品，其特征在于：所述产品包括权利要求5-7中任一项所述的试剂盒，并且，所述检测方法包括：

利用所述四个引物对中的至少一个引物对，通过PCR扩增反应对从待测样品中提取到的核酸进行扩增，

将扩增后的产物滴加到所述试剂盒的核酸免疫层析试纸上，并观察检测带和指控带上是否形成有色条带；若在检测带和质控带上均形成肉眼可见的有色条带，则判断为阳性；若检测带上未形成有色条带，且质控带上形成肉眼可见的有色条带，则判断为阴性；若质控带上未形成有色条带，则判断为无效。

10.根据权利要9所述的产品，其特征在于：所述致病菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、无乳链球菌中的任意一种或两种以上。