[发明专利]一株羊口疮病毒弱毒株及其应用

说明书

本发明提供一株羊口疮病毒弱毒株及其应用，该毒株是羊口疮病毒弱毒QF_nm2015株，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V201903。本发明通过对已分离的羊口疮病毒在羔羊睾丸细胞上增殖培养，通过连续传代培育出羊口疮病毒弱毒株，该病毒分离毒株对研制地方性ORFV的有效疫苗提供了优质的材料基础和选择空间，对于羊口疮的预防及治疗具有重要的意义。

技术领域

本发明属于麻保沙星药物制剂技术领域，具体涉及一株羊口疮病毒弱毒株及其应用。

背景技术

羊口疮(Orf)又称羊传染性脓疱病(CE)，接触传染性脓疱性口炎，其主要由羊口疮病毒(Orfv)引起的一种接触性人畜共患病。ORF传染性强，发病率高。该病分布广泛，养羊的国家基本均有该病发生的相关报道，该病的发生对于养殖造成了严重经济损失，我国的养羊业均遭受影响。人也会被感染Orfv，主要症状有手部、鼻、嘴唇及面部出现丘疹，免疫失调者可出现非典型增生病变及自身免疫性障碍等并发症。Orfv是痘病毒科副痘病毒属中的典型代表。

目前并没有治疗羊口疮的特效药，所以对于羊口疮的预防工作就显得尤为重要，羊口疮疫苗现已研究出痂皮强毒疫苗、灭活疫苗、弱毒疫苗，但是到目前为止，灭活疫苗的保护力低，弱毒疫苗也有散播病毒和毒力反强的风险，应用的弱毒疫苗在免疫过程中仍效果不理想、保护率不高，到目前为止没有有效的疫苗用于羊口疮的防治。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一株羊口疮病毒弱毒株及其应用，该株具有较弱的毒力和很好的免疫原性。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一株羊口疮病毒弱毒株，是羊口疮病毒弱毒QF_nm2015株，保藏编号为CCTCC NO：V201903，保藏日期为2019年3月29日。

进一步的，所述弱毒株是通过一株羊口疮病毒强毒株传代90代获得，所述强毒株是羊口疮病毒弱毒QD/2015株，保藏编号为CCTCC NO：V201963，保藏日期为2019年9月2日。

进一步地，所述羊口疮病毒强毒株在羊睾丸细胞上的TCID₅₀为10^-4.5，以及培养20代细胞毒TCID₅₀结果为10^-5.5，50代细胞毒TCID₅₀结果为10^-6，70代细胞毒TCID₅₀结果为10^-6.5，90代细胞毒TCID₅₀结果为10^-6.6。

第二个方面，本发明提供上述羊口疮病毒弱毒株在预防羊口疮病毒中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明通过对已分离的羊口疮病毒在羔羊睾丸细胞上增殖培养，通过连续传代培育出羊口疮病毒弱毒株，该病毒分离毒株对研制地方性ORFV的有效疫苗提供了优质的材料基础和选择空间，对于羊口疮的预防及治疗具有重要的意义。

附图说明

图1为本发明实施例1的荧光定量PCR扩增结果图，其中M为DL2000 Marker； 1病料研磨液；2～3分离株。

图2为本发明实施例1的荧光定量PCR扩增曲线，其中2-1为PCR检测扩增曲线，2-2为PCR标准曲线，并且在图中：1～5：1×10³～1×10⁷copies/μL标准品； 6：检测20代细胞毒液；7：检测50代细胞毒液；8：检测90代细胞毒液；9：检测90代细胞毒液。

图3为本发明实施例1中ORFV-Q株B2L基因与其他25个国内外参考株的核酸同源性比对结果。

图4为本发明实施例1中F1L基因与选取的20个参考株的核酸同源性比对结果。