[发明专利]B群脑膜炎球菌fHBP多变体融合蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种B群脑膜炎球菌fHBP多变体融合蛋白，该蛋白的氨基酸序列为将fHBP变体V1的氨基酸序列、fHBP变体V2的氨基酸序列和fHBP变体V3的氨基酸序列通过连接子依次连接，制备得到包含上述多肽片段的融合蛋白，该蛋白易表达、能够正确折叠。采用该融合蛋白制备得到的疫苗，相对于现有疫苗中以变体V1、变体V2和变体V3任一单变体或其三种变体的混合蛋白制备的疫苗，具有更好的免疫原性，免疫动物后能得到更高滴度的抗体，其抗原谱比现有的疫苗更广、能够覆盖更多类型的变体菌株。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，特别涉及一种B群脑膜炎球菌fHBP多变体融合蛋白及其制备方法与应用。

背景技术

B群脑膜炎球菌(Neisseria.meningitidis,MenB)不同于其他4种脑膜炎球菌(A,C,W135和Y)的荚膜多糖。研究显示，MenB的荚膜多糖与许多人类细胞(如胎儿的大脑发育期间细胞)表面的糖相似，这种荚膜多糖是α(2→8)N-乙酰神经氨酸(也称多唾液酸)的同聚物。因此，MenB的荚膜多糖在人体内被识别为一种自身抗原，且免疫原性差，不适合作为MenB疫苗开发的有效组分。

目前对MenB疫苗开发主要集中于非荚膜多糖免疫原，尤其是纯化后重组蛋白形式的膜蛋白或外膜囊泡(OMVs)。新的MenB疫苗发现方法，包括基因组采集、蛋白质组学和免疫学途径，已经鉴定出多个用于免疫预防MenB疾病的新疫苗靶标。这些疫苗靶标包括转铁结合蛋白、肝素结合蛋白(NHA，也称GNA2132)，人类因子H结合蛋白(fHBP，也称为LP2086或GNA1870)，铁调控的外膜蛋白(FetA)，黏附素A(NadA，也称为GNA 1994)，和其他的蛋白。fHBP是目前MenB最有前景的一种疫苗抗原，它几乎在所有MenB菌株的细胞膜上表达，为一种脂蛋白。fHBP是一种序列高度多样性的表面抗原，可被分为3个变体，每个变体内的氨基酸序列保守性为89-100％，而每个变体间的序列相似性只有59％左右，尤其是变体1(V1)和其他两个变体(V2、V3)之间没有明显的交叉保护反应。

fHBP的一个重要功能是它可结合人补体因子(fH)。fH与细菌表面结合会加速C3/C5转化酶衰退，这会降低旁路途经激活，且有助于生物体的活力，从而避免非免疫人血清或血液补体介导的杀伤。fHBP作为一个疫苗抗原，抗fHBP抗体即可直接激活经典补体途径溶菌，也可阻止fH与细菌表面结合。

已有学者对fHBP的结构和抗原表位作了较为深入的研究。fHBP包含A、B、C这3个结构域，结构域A在3个变体中具有高度保守性。V1表达一个位于结构域B的抗原表位，V2和V3的抗原表位主要位于结构域C中，且在V2和V3的结构域C中仅有个别氨基酸差异。已有近12种抗fHBP的单克隆抗体(MAbs)被研究出，而且大多数MAbs对fH与fHBP或细菌表面的结合有明显抑制作用，从而使得细菌对旁路途径介导的溶菌更为敏感。

目前已上市的2种MenB蛋白疫苗产品中fHBP均以单变体的形式单独或与非fHBP蛋白融合表达。产品针对性预防欧美地区流行性MenB菌株，而对其他的变体菌株并不具有广泛的覆盖性。因此，有必要提供一种提高fHBP的抗原谱、减少生产工序、可刺激机体产生针对不同变体菌株的抗体的蛋白，以制备一种更加简单和更加有效的MenB疫苗。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种制备方法简单、可刺激机体产生针对不同变体菌株的抗体的B群脑膜炎球菌fHBP多变体融合蛋白及其制备方法。

为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：

一种B群脑膜炎球菌fHBP多变体融合蛋白，其氨基酸序列包括：fHBP变体V1的氨基酸序列、fHBP变体V2的氨基酸序列和fHBP变体V3的氨基酸序列，所述fHBP变体V1的氨基酸序列、fHBP变体V2的氨基酸序列和fHBP变体V3的氨基酸序列通过连接子依次连接。

本发明还提供了一种编码所述B群脑膜炎球菌fHBP多变体融合蛋白的基因，具体技术方案如下：