[发明专利]一种血清中糖皮质激素的检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种血清中糖皮质激素的检测方法及试剂盒，涉及激素的检测技术领域。本发明将待测样品预处理后，进行固相支持液‑液萃取，然后用液相色谱‑串联质谱法检测，具有溶剂用量少、简便快速、准确可靠等优点，适合于大批量血清样品中糖皮质激素的快速检测。同时，利用血清中糖皮质激素的检测方法制备的试剂盒具备操作简便快速、检测成本低、特异性高等优点，可弥补市场现有产品的不足。

技术领域

本发明涉及激素的检测技术领域，具体涉及一种糖皮质激素的检测方法及试剂盒。

背景技术

糖皮质激素(Glucocorticoid，GCs)是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，主要为皮质醇，对糖脂肪和蛋白质等生物合成和代谢过程具有较强的调节作用，还具有抑制免疫应答、抗炎、抗毒、抗休克作用。目前，临床上至少有200-300种疾病会应用GCs治疗，其不仅用于各种肾上腺皮质功能异常性疾病的替代治疗，而且也广泛地应用于治疗自身免疫性疾病、过敏性疾病、血液系统疾病、哮喘、器官移植、皮肤病、眼疾等。GCs广泛应用于临床的同时，也相继出现了较多不合理应用的现象，如诱发和加重感染引起中枢神经系统并发症和内分泌系统紊乱等。如果不恰当或长期使用GCs会导致多种药源性疾病，甚至危及生命。因此，有必要建立一种灵敏的糖皮质激素检测方法来监控此类药物的使用。

目前糖皮质激素检测手段主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和液相色谱-质谱法(LC-MS)。GC和HPLC方法的灵敏度低，选择性差。GC-MS需要繁琐的衍生过程方法。HPLC-MS因具有高的灵敏度和特异性，已成为痕量药物分析的首选方法。但HPLC-MS仍需要较好的净化效率来减少基质影响，以保证仪器的稳定性，传统的前处理方法耗时费力，无法满足大批量血清样品中糖皮质激素的快速检测需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种血清中糖皮质激素的检测方法及试剂盒，具有溶剂用量少、简便快速、准确可靠等优点，适合于大批量血清样品中糖皮质激素的快速检测。同时，利用血清中糖皮质激素的检测方法制备的试剂盒具备操作简便快速、检测成本低、特异性高等优点，可弥补市场现有产品的不足。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

一种血清中糖皮质激素的检测方法，待测样品预处理后，进行固相支持液-液萃取，然后用液相色谱-串联质谱法检测。

进一步的技术方案在于，固相支持液-液萃取为将预处理后样品上样到固相支持液-液萃取板上，静置，再用洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，吹干。

进一步的技术方案在于，所述固相支持液-液萃取板为96孔板，静置时间为10-30min，洗脱剂为甲基叔丁基醚，洗脱为在重力作用下进行洗脱，吹干采用45℃氮气吹干。

进一步的技术方案在于，所述预处理为向待测样品中加入蛋白沉淀剂，震荡混匀，离心。

进一步的技术方案在于，所述蛋白沉淀剂为硫酸锌溶液，硫酸锌溶液浓度为0.1mol/L，硫酸锌溶液与待测样品的体积比为0.5-1:1。

进一步的技术方案在于，所述液相色谱条件如下：色谱柱为C18柱，流动相A为0.1％的甲酸溶液，流动相B为乙腈，流速为0.25mL/min，梯度洗脱程序为0.1-2min,30％B；2-7.5min,80％B；7.5-8.5min,80％B；8.5-12min,30％B。

进一步的技术方案在于，所述质谱条件如下：电喷雾离子源，离子源温度300℃；毛细管电压3200V；正离子扫描模式；采用全扫描/数据依赖自动二级全扫描，归一化碰撞能量35％±50％；提取分析物的精确子离子定量，二级质谱图定性。

另外，本发明提供一种血清中糖皮质激素的检测试剂盒，如表1所示。

表1