[发明专利]一种血清中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种血清中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测方法及试剂盒，涉及免疫抑制剂的检测技术领域。本发明将待测样品预处理后，进行固相支持液‑液萃取，然后用高效液相色谱法检测，具有样品用量少、操作简便、重现性好、回收率高等优点。同时，利用血清中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测方法制备的试剂盒具备操作简便快速、检测成本低、特异性高等优点，可弥补市场现有产品的不足。

技术领域

本发明涉及免疫抑制剂的检测技术领域，具体涉及一种霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测方法及试剂盒。

背景技术

霉酚酸酯(MMF)是一种新型的免疫抑制剂，由瑞士罗氏(Roche)制药有限公司开发，1995年8月首次在美国上市。MMF作为前体药物，口服后在体内代谢为活性产物霉酚酸(MPA)，MPA可抑制T、B淋巴细胞中的嘌呤的合成来减少免疫活性淋巴细胞进而抑制排斥反应。MPA在体内部分代谢为酚化葡萄糖醛麦考酚酸(MPAG)，MPAG无药理作用，可被分泌入胆汁并进入小肠，经肠道作用再次分解为MPA。目前临床以常规剂量用于急性抗排斥反应，由于MPA的血药浓度具有个体差异性，所以会产生疗效的差异性，严重甚至于不良反应的发生。因此通过监测MPA和MPAG的血药浓度，及时调整MMF的给药量，减少不良反应，为达到最佳疗效是十分必要的。

目前，有关霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的血药浓度测定方法主要包括免疫法、色谱法。免疫法目前在国内尚无试剂盒的供应，不能作为霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物血药浓度监测的常规方法。色谱法为常用方法，但在色谱检测前需要对样品进行处理，目前比较常见的处理方法为将蛋白沉淀去除后进行色谱检测，该方法只能将血清中的蛋白除去，未能将血液成分中其他干扰杂质除去，难以对霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物进行准确检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种血清中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测方法及试剂盒，具有样品用量少、操作简便、重现性好、回收率高等优点。同时，利用血清中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测方法制备的试剂盒具备操作简便快速、检测成本低、特异性高等优点，可弥补市场现有产品的不足。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

一种血清中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测方法，待测样品预处理后，进行固相支持液-液萃取，然后用高效液相色谱法检测。

进一步的技术方案在于，固相支持液-液萃取为将预处理后样品上样到固相支持液-液萃取板上，静置，再用洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，吹干。

进一步的技术方案在于，所述固相支持液-液萃取板为96孔板，静置时间为10-30min，洗脱剂为甲基叔丁基醚和乙酸乙酯的混合溶剂，洗脱为在重力作用下进行洗脱，吹干采用45℃氮气吹干。

进一步的技术方案在于，所述甲基叔丁基醚和乙酸乙酯的混合溶剂中甲基叔丁基醚和乙酸乙酯的体积比为3:1。

进一步的技术方案在于，所述预处理为向待测样品中加入蛋白沉淀剂，震荡混匀，离心。

进一步的技术方案在于，所述蛋白沉淀剂为乙腈，乙腈与待测样品的体积比为0.5-1:1。

进一步的技术方案在于，所述高效液相色谱法检测条件如下：以甲醇-磷酸二氢钠为流动相，色谱柱为C18柱，流动相流速为1mL/min，柱温为45℃。

进一步的技术方案在于，流动相中甲醇和磷酸二氢钠体积比为55:45，用磷酸调节流动相pH至3.0。

另外，本发明提供一种血清中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的检测试剂盒，如表1：