[发明专利]一种分析七种罗汉果皂苷的LC-MS/MS负离子模式检测方法

说明书

本发明涉及一种分析罗汉果提取液中七种罗汉果皂苷含量的LC‑MS/MS方法，通过液相色谱‑串联质谱法(LC‑MS/MS)法对罗汉果提取液的甲醇溶液中七种罗汉果苷进行分离、鉴别和定量的方法。能够达到更好分离的同时也缩短了分析时间，能够应用于更复杂的基质场景的检测，具有灵敏度高、准确性强的优点。方法检出限在9.288ng/mL～18.159ng/mL，回收率在95.5％～103.7％之间，相对标准偏差(RSD)为3.5％～5.2％，回收率高，重复性好。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种分析罗汉果提取液中七种罗汉果皂苷含量的LC-MS/MS方法，是通过将罗汉果提取液的甲醇溶液，通过液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)法对其中七种罗汉果苷进行分离、鉴别和定量的方法。

背景技术

罗汉果为葫芦科植物罗汉果的干燥果实，性甘、无毒无害，常用于肺火、燥咳、咽痛、便秘等的治疗。罗汉果主要分布于热带、亚热带山区，适生于高海拔丛林中。是广西重要的经济作物之一，同时也是广西主要土特产之一。

罗汉果皂苷是罗汉果的主要甜味成分，它们的主要结构特点是具有罗汉果醇这个共同的苷元结构。其中罗汉果苷Ⅴ是主要的活性成分，含量较大，约为总含量的3.5％～3.9％；甜度约是蔗糖的250～350倍；此外还有甜度更高的异-罗汉果苷Ⅴ，其甜度约为蔗糖的500倍。

目前对罗汉果主要皂苷成分的含有量测定方法主要以HPLC为主，以及少量HPLC-MS法，且这4种罗汉果皂苷具有相似的结构，仅用高效液相色谱很难得到满意的分离结果；灵敏度不高是另一个问题，在复杂的实际样品中含有量较低，响应值不高，同时会有很大的干扰。而建立液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)，采用的多反应监测模式能够最大程度避免杂质的干扰，提供更低的检出限和更好的选择性。

发明内容

本发明的目的正是基于上述现有技术状况而提出的一种分析罗汉果提取物中7种罗汉果皂苷含量的LC-MS/MS方法，旨在提供更高效的分离检测方法，能够避免杂质的干扰，提高方法的选择性和定量结果的准确性。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明的分析罗汉果提取物中7种罗汉果苷含量的LC-MS/MS方法，是将罗汉果提取液经甲醇稀释后，以液相色谱-串联质谱法进行测定，具体步骤如下：

a、称取样品：称取1.0g提取液于50mL具塞离心管中，精确到0.1g；加入一定体积的甲醇进行溶解后，经0.22μm有机相滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析；

b、准备标准工作溶液：分别称取0.01g(精确至0.1mg)每种罗汉果皂苷标准品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制浓度为1.0mg/mL的单标；再配成浓度为5μg/mL的混合标准溶液；最后用甲醇稀释并最终配制成具有浓度梯度的各种罗汉果皂苷的标准工作溶液；

c、LC-MS/MS测定：吸取配制好的不同浓度的标准工作溶液，注入LC-MS/MS；

d、含量结果的计算:以外标法进行罗汉果皂苷目标物的定量分析，即以目标物的二级选择离子峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对实际样品进行测定，测得检出目标物的二级选择离子峰面积，代入标准曲线，求得提取液中罗汉果皂苷的含量。