[发明专利]一株维生素B1

说明书

一株维生素Bsubgt;1/subgt;单克隆抗体杂交瘤细胞株CBDD及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明合成了维生素Bsubgt;1/subgt;半抗原，制备了维生素Bsubgt;1/subgt;完全抗原，并将它与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，细胞融合及杂交瘤细胞筛选得到一株维生素Bsubgt;1/subgt;单克隆抗体杂交瘤细胞株CBDD，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18512，保藏日期2019年10月14日。此细胞株分泌的单克隆抗体，对维生素Bsubgt;1/subgt;具有较好的特异性和检测灵敏度（ICsubgt;50/subgt;为20 ng/mL）。本发明成果可用于建立婴幼儿食品、乳品和其他含有维生素Bsubgt;1/subgt;的食品中维生素Bsubgt;1/subgt;含量的免疫检测方法，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株维生素B₁单克隆抗体杂交瘤细胞株CBDD及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

维生素B₁属于B族维生素，也称为盐酸硫铵，广泛存在于食品中并且可作为膳食添加剂，每日推荐的维生素B₁摄入量成人通常为8-15mg。维生素B₁以辅酶形式参与糖的分解代谢，有保护神经系统的作用，维生素B₁是维持正常神经活动所必需的。此外，维生素B₁还能促进肠胃蠕动，增加食欲。维生素B₁在体内转变成硫胺素焦磷酸，参与糖在体内的代谢。维生素B₁缺乏时，糖在组织内的氧化受到影响。还会抑制胆碱酯酶活性的作用，缺乏维生素B₁时该酶活性过高，乙酰胆碱大量破坏使神经传导受到影响，可引起多种神经炎症，还可造成胃肠蠕动缓慢，消化道分泌减少，食欲不振、消化不良等障碍。因此，有必要建立快速、高效的维生素B₁检测方法。

维生素B₁含量分析方法有高效液相色谱法(HPLC)、液质联用 (LC-MS)、荧光分光光度法等仪器方法，这些检测方法具有耗时、步骤繁琐、无法进行现场快速检测、成本高等缺点，因此建立快速简便的维生素B₁检测方法具有重要意义。酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为维生素B₁检测提供了一种新的检测途径。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆单体是重要前提。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处，提供一株维生素B₁单克隆抗体杂交瘤细胞株CBDD及其应用，由该细胞株制备的抗体对维生素B₁具有较好的特异性和检测灵敏度，可以用来建立维生素B₁的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株维生素B₁单克隆抗体杂交瘤细胞株CBDD，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年10月14日，保藏编号CGMCCNo.18512。

维生素B₁单克隆抗体，由所述保藏编号为CGMCC No.18512的维生素B₁单克隆抗体杂交瘤细胞株CBDD分泌产生。

所述维生素B₁单克隆抗体的应用，建立维生素B₁含量的免疫检测方法，应用于食品中维生素B₁的检测。所述检测领域为婴幼儿食品、乳品或其他含有维生素B₁的食品中。

所述维生素B₁单克隆抗体杂交瘤细胞株CBDD的免疫原VB₁-HS-BSA的制备方法，主要包括以下步骤：