[发明专利]一种CD81的适配体及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体的说涉及一种CD81的适配体及其应用，所述CD81的适配体，具有(a)序列1所示核苷酸序列，或者(b)序列1所示核苷酸序列经一个或多个碱基缺失或替换后的序列。本发明的CD81的适配体与CD81的结合具有极高的选择性和特异性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及CD81的适配体及其应用。

背景技术

适配体(aptamer)是一小段经过筛选得到的单链寡核苷酸序列(DNA/RNA)，能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合。适配体可以与大分子如蛋白、细胞进行结合；也可以与一小段多肽、小分子药物、糖类化合物及离子进行结合。适配体可以被快速合成、鉴定及修饰，并且具有高重复性、高纯度及价格低廉等优势，使得适配体在疾病早期诊断、监测与治疗方面具有重要作用，尤其是基于外泌体的诊断。

外泌体是一类包含了小RNA，DNA和蛋白质的膜泡结构(30-150nm)。外泌体广泛存在于生物体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等，并且绝大多数培养的细胞均可分泌外泌体。外泌体一直被视为特异性分泌的膜泡，能够参与细胞间通讯，细胞微环境调节等众多生物学功能调控，包括免疫反应、神经递质传递、肿瘤生长及转移等。越来越多的研究表明，外泌体大量存在生物体的循环系统，非常适宜于相关疾病的诊断开发。已经有公开研究表明，外泌体上的GPC1可以用作胰腺导管癌的早期诊断；而血浆外泌体上的EGFR T790M突变可以用作非小细胞肺癌的伴随诊断标志物。

CD81是四跨膜蛋白家族成员之一，其分子量为26kD。CD81在细胞内和跨细胞膜的区域具有高度保守的氨基酸序列，而在细胞外的区域则具有易变性，不同种属中胞外的氨基酸序列不同。已经有大量的研究表明CD81与众多生物功能相关，包括细胞转移、细胞黏附，细胞增殖和分化等。近期的公开报道证实CD81在外泌体上也大量存在，尤其在各种肿瘤相关的血清外泌体上丰度较高，包括乳腺癌、结直肠癌、肝癌和肺癌等。此外，相比于外泌体的其他标志物，如CD63,TSG101,Rab-5b等，CD81是一种更广谱的外泌体标志物。因此，靶向CD81的适配体非常适合于外泌体的提取、纯化及后续基于外泌体的分子诊断。

目前的外泌体分离纯化试剂盒主要基于粒径、密度梯度及特殊的外泌体表面标志物，包括密度梯度离心法、超速离心法、色谱分析法及抗体免疫结合法等方式。但是这些方法得到的外泌体在纯度、完整性及工艺成熟度都不够完善，耗时、价格高等缺点难以避免。

发明内容

本发明的目的是提供CD81的DNA适配体及其应用。

一种核酸适配体，所述核酸适配体为下述任一种单链寡核苷酸分子：

A1、核苷酸序列是序列表中序列1的单链寡核苷酸分子，

A2、将序列表中序列1所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的单链寡核苷酸分子具有50％以上的同一性且与CD81特异结合的单链寡核苷酸分子；

上述核苷酸序列中，所述90％以上的同一性可为至少91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。

其中，所述核酸适配体针对人的CD81蛋白，可与人的CD81蛋白特异性结合。

进一步，(A2)中所述缺失或者替换后的核苷酸序列具有如序列2所述的核苷酸序列。

进一步，(A2)中所述缺失或者替换后的核苷酸序列具有如序列3所述的核苷酸序列。

进一步，(A2)中所述缺失或者替换后的核苷酸序列具有如序列4所述的核苷酸序列。

进一步，(A2)中所述缺失或者替换后的核苷酸序列具有如序列5所述的核苷酸序列。

进一步，(A2)中所述缺失或者替换后的核苷酸序列具有如序列6所述的核苷酸序列。