[发明专利]己糖激酶喷干粉的制备方法

说明书

本发明属于酶制剂的制备，特别是指一种己糖激酶喷干粉的制备方法。按照公开号为CN106479992A中的方法制备己糖激酶纯酶液；在己糖激酶纯酶液中加入山梨醇、硫酸钠作为喷干保护剂，置于4℃保存3h，使保护剂充分溶解并在酶液中分布均匀；以进风口80℃、出风口65℃、进样速度为12转/分钟的条件对加有保护剂的酶液喷雾干燥得到白色己糖激酶喷干粉。本发明解决了目前己糖激酶直接进行喷雾干燥导致的失活率高的问题，具有己糖激酶喷干粉酶活保存率高、相对液态己糖激酶酶性质较稳定、符合国标中对于试剂盒的使用要求且更利于保存等优点。

技术领域

本发明属于酶制剂的制备，特别是指一种己糖激酶喷干粉的制备方法。

背景技术

己糖激酶是生物糖酵解代谢途径的第一个酶，催化葡萄糖磷酸化，生成葡萄糖-6-磷酸，葡萄糖-6-磷酸继续参与反应，完成糖代谢。依据此原理配制的己糖激酶法血糖检测试剂盒具有特异性强、准确度高的优点，适用于全自动分析仪，特别适用于急诊检验使用，利用己糖激酶法测定血糖含量也是国际上推荐的葡萄糖测定方法。

己糖激酶在生产和使用的过程中，需要长期保存，液体状态下4℃保存时间短，-20℃冻存会因反复冻融导致聚集、修饰、降解、污染等不良后果。喷雾干燥是通过喷雾装置将酶液喷成直径仅为几十微米的雾滴，分散于热气流中，水分迅速蒸发而得到粉末状的干燥酶制剂。加入喷干保护剂能够取代水与蛋白结合，使蛋白的结构免遭破坏，保证了己糖激酶的稳定性。己糖激酶的干粉在生物医药领域具有非常广泛的应用前景，但是目前国内己糖激酶的喷雾干燥技术还不够完善，己糖激酶直接进行喷雾干燥，失活率达99％以上，因此选择合适的己糖激酶喷干保护剂至关重要。

在己糖激酶法血糖试剂盒配制中，使用较多的是固态己糖激酶，固态己糖激酶较液态己糖激酶酶性质较稳定，而且也利于保存。己糖激酶作为诊断试剂盒配制中的关键酶，其酶性质决定了试剂盒品质的好坏，特别是己糖激酶的稳定性，直接影响诊断试剂盒的稳定性。在临床化学体外检测试剂(盒)的检测标准中(GB/T 26124-2011)规定，稳定性是检验诊断试剂盒合格与否的重要指标，因此，将液态己糖激酶制备成固态己糖激酶能更好的应用于试剂盒的配制中。

申请人检索到的专利文献包括：

查阅国内外相关专利，未曾查询到关于己糖激酶喷干粉的制备方法的相关专利。公开号为CN106932353A的专利文献中公开了一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒，通过R1和R2两种试剂来完成诊断试剂盒的配制，其中己糖激酶是试剂R1的组成部分，但上述专利文献未提及己糖激酶喷干粉的制备；公开号为CN110038523A的专利文献中公开了一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法，该专利文献公开了一种用于分离纯化己糖激酶的亲和层析介质的制备方法，该专利文献未提及己糖激酶喷干粉的制备。目前国内对己糖激酶的研究相对较少，公开号为CN106479992A的专利文献中公开了一种诊断用己糖激酶的制备方法，该专利是利用微生物菌株生产制备出了液态己糖激酶，但未涉及己糖激酶干粉的制备。公开号为CN108048441A的专利文献中公开了一种己糖激酶冻干粉的制备方法，该专利文献是利用冻干的手段制备己糖激酶冻干粉。

发明内容

本发明的目的在于提供一种己糖激酶喷干粉的制备方法，所制备的己糖激酶喷干粉相比现有方法制备的产品失活率低且性质稳定。

本发明的整体技术构思是：

己糖激酶喷干粉的制备方法，由如下工艺步骤组成：

A、按照公开号为CN106479992中的方法制备酶活为200-300U/ml的己糖激酶纯酶液；

B、在步骤A中制备的己糖激酶纯酶液中加入2％-5％(m/v)山梨醇、1％-2％(m/v)硫酸钠作为喷干保护剂，置于4℃保存1-3h，使保护剂充分溶解并在酶液中分布均匀；