[发明专利]可溶性的Aβ1-42变体、Aβ1-42校准品及试剂盒

说明书

本发明提供了一种可溶性的Aβ1‑42变体、Aβ1‑42校准品及试剂盒。该可溶性的Aβ1‑42变体包含用亚氨基酸修饰野生型Aβ1‑42蛋白中一个或多个位点的序列。由于亚氨基酸上的亚氨基在与其他氨基酸的羧基脱水缩合形成肽键后，不再存在‑N‑H‑结构，无法与肽链上的C＝O形成氢键，从而抑制β片层的形成，提高Aβ1‑42蛋白在溶液中的稳定性。

技术领域

本发明涉及检测试剂领域，具体而言，涉及一种可溶性β淀粉样蛋白及其应用。

背景技术

β片层结构又称β折叠或β转角，是蛋白质的一种二级结构，两条以上氨基酸链(肽链)，或同一条肽链之间的不同部分可形成平行或反平行排列，肽平面之间呈手风琴状折叠，成为“股”，股与股之间会通过氢键固定，这种结构称之为β折叠。在β折叠中，所有的肽键都参与链间氢键的形成，蛋白质相邻肽链主链的-N-H-和C＝O之间形成有规则的氢键，氢键与β折叠的长轴呈垂直关系并维持着β结构的稳定。

部分蛋白质，尤其是与神经系统相关的蛋白质如β淀粉样蛋白(Aβ)、α-突触核蛋白等，由于其分子内存在高度疏水区域，且易形成β片层结构，容易发生团聚，形成聚集体，影响其稳定性。

Aβ是由淀粉样蛋白前体(amyloidprecursorprotein，APP)经β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而产生的39-43个氨基酸的片段。在大脑皮层和海马发生β淀粉样蛋白的沉积是阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)的病理特征之一。AD患者由于遗传或其他因素，引起β淀粉样蛋白产生增多或清除减少，β淀粉样蛋白积累形成寡聚体，引起微妙的突触损伤、胶质细胞活化、炎症、氧化应激和Tau蛋白过磷酸化等病理变化，导致广泛的突触功能异常和选择性的神经元死亡，使得患者产生认知功能障碍。

Aβ的主要组分是Aβ1-40、Aβ1-42、Aβ1-43，其相对分子质量约为4kDa，其中Aβ1-42具有更强的疏水性、聚集性和神经毒性。Aβ1-42寡聚体在AD患者脑中的含量是正常人群的数十倍，细胞外不可溶的Aβ沉淀和淀粉样斑块在AD患者大脑中大量存在，而可溶的Aβ1-42在AD患者脑脊液中的浓度比在正常人脑脊液中的明显减低，通过血脑屏障进入血清中的Aβ1-42含量更是远远低于在脑脊液中含量，因此Aβ1-42具有重要的研究价值。但Aβ1-42易聚集的特点，易造成蛋白的抗原表位被遮蔽，在溶液中稳定性差，限制了Aβ1-42蛋白的单体研究和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可溶性的Aβ1-42，以解决其在液体环境中容易团聚而不稳定的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了可溶性的Aβ1-42变体，其包含野生型β淀粉样蛋白的经修饰的氨基酸序列，其特征在于，用亚氨基酸修饰野生型Aβ1-42，其中修饰位点包含野生型Aβ1-42中的一个或多个位点。

进一步的，亚氨基酸选自脯氨酸和/或羟脯氨酸。

进一步的，修饰位点包含野生型Aβ1-42中的第17-21或第29-36区段中的一个或者多个位点；优选的，所述的修饰位点包含野生型Aβ1-42中的第17-21或第29-36区段中的至少两个位点；更优选的，修饰位点在野生型Aβ1-42的第17-21区段中包含至少一个修饰，并且在第29-36区段中包含至少一个修饰。

进一步的，修饰方式包括替换和/或插入；优选的，所述的修饰为替换。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种Aβ1-42校准品，其包含权利要求上述的一种可溶性Aβ1-42变体的氨基酸序列。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种Aβ1-42检测试剂盒，其包含上述的一种蛋白校准品。