[发明专利]用于检测产毒生殖支原体的荧光定量PCR方法及相应的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测产毒生殖支原体的荧光定量PCR方法及相应的试剂盒。本发明巧妙的应用了特异性的基因检测区分生殖支原体与其它原体属，以及产毒和非产毒的生殖支原体属，通过综合判断，得出准确的菌属信息。本发明与现有的主流检测试剂盒相比，本发明用于检测产毒生殖支原体的试剂盒具有灵敏度高、快捷方便、特异型好、判断严谨准确等优势，具有良好的应用前景和市场价值。

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种通过特异性基因对产毒生殖支原体进行荧光定量PCR检测的方法和相应的检测试剂盒。

背景技术

支原体是一类比细菌小比病毒大的原核生物，广泛分布于自然界，包括一些动物与人类。到目前已从人体内分离出几种支原体，其中生殖支原体(Mycoplasma genitalium)是人类泌尿生殖道感染潜在的病原体，也是人类泌尿生殖道感染的重要病因之一。除引起尿道炎外，伴有抗体的产生，并与前列腺炎、盆腔炎性疾病有关。

生殖支原体为支原体科柔膜菌纲成员，其基因组仅580kb，是最小的具有自我复制能力的生物体。生殖支原体体外培养困难，生长需要1-2个月。

生殖支原体在人群中流行率平均为0.8-4.1％，性病门诊感染率更高平均为4.0-19.4％。而男性感染生殖支原体可表现为急性非淋菌性尿道炎、持续性尿道炎、附睾炎、直肠炎等；女性表现为尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、不孕、早产、异位妊娠等。在相关检测方面，主要基于MgPa粘附素基因或16S rRNA基因进行核酸扩增(PCR)，而近年，功能基因新片的成熟技术，带来非常多微生物检测应用于环境或医学临床上，而本项目乃基本独家芯片技术开发开发全国产基因芯片针对生殖支原体做高效且高精准度的检测。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用于检测产毒生殖支原体的荧光定量PCR方法。

具体地，上述方法包括如下步骤：

S1、收集样品；

S2、提取基因组DNA；

S3、检测生殖支原体属特异性基因rpoB、gene1、gene2和gene3以及产毒特异性基因gene4；

S4、读取扩增Ct值；当所述生殖支原体属特异性基因中至少1个基因和所述产毒特异性基因中至少1个基因的Ct值均小于35时，产毒生殖支原体的检测结果为阳性；当所述生殖支原体属特异性基因rpoB、gene1、gene2和gene3的Ct值大于35和/或所述产毒特异性基因gene4的Ct值大于35时，产毒生殖支原体的检测结果为阴性。

作为一种优选技术方案，所述生殖支原体属特异性基因rpoB

(NCBI Accession Number：AY191424.1)的检测引物如SEQ ID NO:1～2所示：

SEQ ID NO:1(5'-TGATGGTAGGAGTGGAATGCC-3')；

SEQ ID NO:2(5'-TCCATCTCACCAAACCGCTG-3')。

所述生殖支原体属特异性基因gene1(NCBI Accession Number：

AFQ04660.1)的检测引物如SEQ ID NO:3～4所示：SEQ ID NO:3

(5'-AAGTGATTGGTGGATTGGCAC-3')；

SEQ ID NO:4(5'-GGCGCAAAATCGAGGTGTTT-3')。

所述生殖支原体属特异性基因gene2(NCBI Accession Number：AFQ04757.1)的检测引物如SEQ ID NO:5～6所示：SEQ ID NO:5