[发明专利]一种胶质纤维酸性蛋白抗体检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种胶质纤维酸性蛋白抗体检测试剂盒和应用，该应用包括：S1、制备冰冻动物脑片；S2、分别吸取待测脑脊液和稀释的兔源性抗人GFAP抗体，按比例为1:1滴加到反应板；S3、将冰冻脑组织切片反盖到反应板上，4℃孵育过夜；S4、脑切片PBS缓冲液漂洗2次；S5、分别吸取稀释的水溶性荧光染料CY3标记的山羊抗兔IgG和稀释的FITC标记的山羊抗人IgG混合液，按比例为1:1滴加到反应板；S6、将冰冻脑组织切片反盖到反应板上，室温孵育2小时；S7、脑切片PBS缓冲液漂洗2次；S8、封片；S9、置荧光显微镜观察。本发明较基于细胞法检测的灵敏度更高，并且方便结果的判读。

技术领域

本发明涉及一种胶质纤维酸性蛋白抗体检测试剂盒及其应用。

背景技术

胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein astrocytopathy，GFAP)是星形细胞的骨架蛋白，也是标志性蛋白。2016年，梅奥诊所通过回顾性检测一批患者的血清和脑脊液中的GFAP抗体，发现一批GFAP抗体阳性的患者，故重新定义了一种以靶向GFAP的特异性抗体为标志物，根据临床病例的回顾发现该疾病主要累及脑膜、脑、脊髓和视神经，并可合并肿瘤，系一种新型的脑膜脑脊髓炎，并且将此疾病统一命名为自身免疫性胶质纤维酸性蛋白星形细胞病(autoimmune glial fibrillary acidic proteinastrocytopathy)，简称自身免疫性GFAP星形细胞病。目前胶质纤维酸性蛋白抗体，即GFAP抗体的检测方法主要有基于细胞法和基于组织法，在临床上暂无统一的推荐方法。

参考文献：

Fang B,McKeon A,Hinson S R,et al.Autoimmune Glial Fibrillary AcidicProtein Astrocytopathy:A Novel Meningoencephalomyelitis[J].JAMA Neurol,2016,73(11):1297-1307.

Flanagan E P,Hinson S R,Lennon V A,et al.Glial fibrillary acidicprotein immunoglobulin G as biomarker of autoimmune astrocytopathy:Analysisof 102patients[J].Ann Neurol,2017,81(2):298-309.

Long Y,Liang J,Xu H,et al.Autoimmune glial fibrillary acidic proteinastrocytopathy in Chinese patients:a retrospective study[J].Eur J Neurol,2018,25(3):477-483.

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种胶质纤维酸性蛋白抗体检测方法，其是一种灵敏度高，检测胶质纤维酸性蛋白抗体的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案予以实现：

一种胶质纤维酸性蛋白抗体检测试剂盒，其是基于大鼠脑组织进行检测，包括兔源性抗人GFAP抗体、PBS缓冲液、荧光染料CY3、山羊抗兔IgG、FITC、山羊抗人IgG。

该试剂盒在胶质纤维酸性蛋白抗体检测中的应用，包括如下步骤：

S1、制备冰冻大鼠脑组织切片；

S2、分别吸取待测脑脊液和稀释的兔源性抗人GFAP抗体，按比例为1:1滴加到反应板；

S3、将冰冻脑组织切片反盖到反应板上，4℃孵育过夜；

S4、脑切片PBS缓冲液漂洗2次；