[发明专利]用于检测产毒人型支原体的荧光定量PCR方法及相应的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测产毒人型支原体的荧光定量PCR方法及相应的试剂盒。本发明巧妙的应用了特异性的基因检测区分人型支原体与其它支原体属，以及产毒和非产毒的支原体属，通过综合判断，得出准确的菌属信息。本发明与现有的主流检测试剂盒相比，本发明用于检测产毒人型支原体的试剂盒具有灵敏度高、快捷方便、特异型好、判断严谨准确等优势，具有良好的应用前景和市场价值。

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种通过特异性基因对产毒人型支原体进行荧光定量PCR检测的方法和相应的检测试剂盒。

背景技术

人型支原体(Mycoplasma hominis)，人型支原体是支原体的一种，它存在于泌尿系和生殖器中，可以引起泌尿系的感染和生殖器的炎症。

人型支原体无细胞壁及前体，菌体内具有非常小的染色体组。支原体由二分裂繁殖，形态多样，该菌落较大，直径在300～1000微米，典型的菌落具有“油煎蛋”的外观。用培养基培养。营养要求比细菌高。由于它没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如青霉素等不敏感。另支原体对热抵抗力差，通常55℃经15分钟处理可使之灭活。

人体支原体引起的感染在临床表现会有尿道刺痛，不同程度的尿急及尿频，引发泌尿系统感染。男性常合并前列腺感染，出现会阴部胀痛。女性患者多以子宫颈为中心扩散的生殖系炎症。而人如检查时发现支原体阳性，但没有任何伴随症状时，不必过度惊慌，因支原体阳性是正常携带状态，并不意味治病。

在相关检测方面，主要基于MgPa粘附素基因或16S rRNA基因进行核酸扩增(PCR)，而近年，功能基因新片的成熟技术，带来非常多微生物检测应用于环境或医学临床上，而本项目乃基本独家芯片技术开发全国产基因芯片针对人体支原体做高效且高精准度的检测。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用于检测产毒人型支原体的荧光定量PCR方法。

具体地，上述方法包括如下步骤：

S1、收集样品；

S2、提取基因组DNA；

S3、检测人型支原体属特异性基因rpoB、gene1、gene2和gene3以及产毒特异性基因gene4；

S4、读取扩增Ct值；当所述人型支原体属特异性基因中至少1个基因和所述产毒特异性基因的Ct值均小于35时，产毒人型支原体的检测结果为阳性；当所述人型支原体属特异性基因rpoB、gene1、gene2和gene3的Ct值大于35和/或所述产毒特异性基因gene4的Ct值大于35时，产毒人型支原体的检测结果为阴性。

作为一种优选技术方案，所述人型支原体属特异性基因rpoB(NCBI AccessionNumber：AF443616.3)的检测引物如SEQ ID NO:1～2所示；

SEQ ID NO:1(5'-ACATTCAAAGGCTGGCGAAG-3')；

SEQ ID NO:2(5'-CACCTGCTGTTACTTCTGAACC-3')。

所述人型支原体属特异性基因gene1(NCBI Accession Number：AUW36898.1)的检测引物如SEQ ID NO:3～4所示；

SEQ ID NO:3(5'-CATGCCCATAAGTGCCTTACC-3')；

SEQ ID NO:4(5'-ATAGTACGCAGCAAACCCGG-3')。

所述人型支原体属特异性基因gene2(NCBI Accession Number：AYN65194.1)的检测引物如SEQ ID NO:5～6所示；