[发明专利]一种辐射生物剂量计、制备方法及应用

权利要求书

1.一种辐射生物剂量计，其特征在于：所述生物剂量计为大肠杆菌SoxR辐射生物剂量计或大肠杆菌Cda辐射生物剂量计；

所述SoxR辐射生物剂量计为在大肠杆菌基因序列中的SoxR启动子基因下游加入EGFP基因的基因工程菌；

所述SoxR辐射生物剂量计中携带目的基因的载体的核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQ ID No.1；

所述Cda辐射生物剂量计为在所述SoxR辐射生物剂量计的基础上，用Cda启动子基因序列替代SoxR启动子基因序列得到的基因工程菌；

所述Cda辐射生物剂量计中携带目的基因的载体的核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQ ID No.2；

所述辐射为γ射线辐射。

2.根据权利要求1所述的一种辐射生物剂量计，其特征在于：所述大肠杆菌为模板大肠杆菌MG1655或宿主大肠杆菌DH5α。

3.一种如权利要求1或2所述的一种辐射生物剂量计的制备方法，其特征在于：

(1)以大肠杆菌基因组为模板，采用PCR扩增目的基因SoxR启动子；以质粒pColD-CA23的基因组为模板，采用PCR扩增目的基因Cda启动子；以利用密码子简并性优化的含EGFP基因序列的PUC 19克隆质粒基因组为模板，所述优化的PUC 19克隆质粒基因组核苷酸序列为核苷酸序列表中的SEQ ID No.3，采用PCR扩增目的基因EGFP；将PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分离，获得所述目的基因片段DNA；

所述目的基因及对应引物如下表所示：

表目的基因及对应引物

(2)将目的基因SoxR启动子片段DNA用EcoRI和XbaI酶切，EGFP片段DNA用XbaI和HindIII酶切，将酶切后的SoxR启动子片段DNA用T4连接酶与酶切后的EGFP片段DNA连接，然后进行琼脂糖凝胶电泳分离，获得大小约1500bp的序列条带，用EcoRI和HindIII酶切，将酶切产物分别与相同用EcoRI和HindIII酶切后的PUC57表达载体用T4连接酶连接，获得所述SoxR辐射生物剂量计中携带目的基因的载体，其核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQ IDNo.1；或将目的基因Cda启动子片段DNA用EcoRI和XbaI酶切，EGFP片段DNA用XbaI和HindIII酶切，将酶切后的Cda启动子片段DNA用T4连接酶与酶切后的EGFP片段DNA连接，然后进行琼脂糖凝胶电泳分离，获得大小约1500bp的序列条带，用EcoRI和HindIII酶切，将酶切产物分别与相同用EcoRI和HindIII酶切后的PUC57表达载体用T4连接酶连接，获得所述Cda辐射生物剂量计中携带目的基因的载体，其核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQ ID No.2；

(3)将所述SoxR辐射生物剂量计中携带目的基因的载体转化进入大肠杆菌感受态细胞，筛选，验证正确，得到所述的SoxR辐射生物剂量计；或将所述Cda辐射生物剂量计中携带目的基因的载体转化进入大肠杆菌感受态细胞，筛选，验证正确，得到所述的Cda辐射生物剂量计。

4.根据权利要求3所述的一种辐射生物剂量计的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中：

以大肠杆菌MG1655基因组为模板，采用PCR扩增目的基因SoxR启动子；

步骤(3)中：

所述宿主细胞即大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌DH5α感受态细胞。