[发明专利]一种粪产碱菌酚亚种筛分培养方法

说明书

本发明提供了一种粪产碱菌酚亚种筛分培养方法，所述方法包括：采集样品；向样品中加入有机质、多种类型的水基钻井液添加剂和氮源得到混合物，调节混合物含水量并置于25℃～32℃下培养，提高各水基钻井液添加剂浓度，驯化，得到含有降解高效菌的混合物；对含有降解高效菌的混合物进行分离纯化；分别制备包含多种类水基钻井液添加剂中单一水基钻井液添加剂的培养液，各培养液中均接种纯化后菌株并测定各培养液中所含添加剂的降解量，选取对各培养液中水基钻井液添加剂降解量均较高的菌株得到粪产碱菌酚亚种。本发明的筛分培养方法简单有效，能够筛分培养出可同时降解磺化褐煤、磺化酚醛树脂、PMA和CMC等多种钻井液添加剂的菌株。

技术领域

本发明涉及石油天然气勘探技术领域，更具体地讲，涉及一种粪产碱菌酚亚种筛分培养方法。

背景技术

天然气勘探开采过程中大量添加磺化褐煤、磺化酚醛树脂、CMC和PAM (添加量在1％-5％)等高分子物质的水基钻井基液，清洁生产后，相当量的高分子添加剂残留在了钻井固废中。这些高分子物质均由多种有机物聚合而成，是水基钻井固废COD的重要来源；同时还具有难降解的特点，可污染环境并对人体健康造成危害，因此，开展水基钻井固废无害化处理研究意义重大。

微生物处理技术具有高效、低耗、无毒、污染降解彻底、消化量大，不受地域限制的优势，目前，该技术已成为有机污染土壤和水体修复的最佳选择。微生物处理技术的关键在于筛选出高效降解菌株，目前已报道了100多个属，200多个种的细菌、放线菌、酵母、霉菌以及藻类等微生物类群能够降解有机污染物，部分菌株已得到应用。但在石油和天然气勘探领域，钻井固废/泥浆微生物处理技术涉及的大多是石油烃类降解微生物，少见水基钻井固废的高分子有机物添加剂的高效降解微生物分离筛选出的报道。陈强等人在“一株卵形假埃希氏菌WNF15及其应用”和“一株短尾帚霉WNF22及其应用”专利中筛选出了2株磺化酚醛树脂和磺化褐煤降解真菌，但菌株都只降解一种添加剂。

因此，如何筛选同时降解多种添加剂的菌株，加强水基钻井固废和水基钻井液添加剂污染环境修复效果至关重要。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的之一在于解决上述现有技术中存在的一个或多个问题。例如，本发明的目的之一在于提供一种简单高效能够筛分培养粪产碱菌酚亚种的方法。

为了实现上述目的，本发明提供了一种粪产碱菌酚亚种筛分培养方法，所述方法可以包括以下步骤：从石油天然气钻井井场采集钾聚磺体系水基钻井固废样品；向所述样品中加入有机质、多种类型的水基钻井液添加剂和氮源得到碳氮比在15～20:1的混合物，调节混合物含水量至28％～30％并置于25 ℃～32℃条件下培养，淘汰无降解能力菌株，逐步提高各水基钻井液添加剂浓度，驯化后得到含有降解高效菌的混合物；对所述含有降解高效菌的混合物进行分离纯化，将分离纯化后的菌株保存备用；分别制备包含所述多种类型的水基钻井液添加剂中单一水基钻井液添加剂的培养液，各培养液中均接种所述保存备用的菌株并测定各培养液中所含水基钻井液添加剂的降解量，选取对各培养液中水基钻井液添加剂降解率均大于5％的菌株，得到粪产碱菌酚亚种，所述粪产碱菌酚亚种分类命名为Alcaligene sfaecalis subsp.Phenolicus GFB-14，已于2019年8月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M 2019646，保藏地址：武汉大学。

与现有技术相比，本发明的筛分培养方法简单高效，能够筛分培养出可同时降解磺化褐煤、磺化酚醛树脂、PAM和CMC等多种钻井液添加剂的菌株，解决了以往分离的菌株只能降解单一物质，需使用复合菌系处理污染物的难题。

附图说明

通过下面结合附图进行的描述，本发明的上述和其他目的和特点将会变得更加清楚，其中：

图1示出了本发明一个示例性实施例的粪产碱菌酚亚种筛分培养方法流程示意图；