[发明专利]一种顺序检测水合肼和亚硫酸氢根的新型荧光探针及其合成及应用

权利要求书

1.一种顺序检测水合肼和亚硫酸氢根的荧光探针，其特征在于，荧光探针具有式（I）所示的结构：

式I。

2.一种如权利要求1所述荧光分子探针的制备方法，其特征在于，包含下列步骤：室温下将2,4-二羟基苯甲醛和乙酰乙酸乙酯溶解于甲醇中，90 ℃下加热回流，反应完全后，旋转蒸发浓缩，再将剩下的液体逐滴滴入水中，抽滤、洗涤滤饼并干燥，可得黄色固体产物；将黄色固体产物溶解于三氟乙酸中，并加入六甲基次胺，于90 ℃下加热回流，反应完全后，逐滴滴入冰水中并用NaOH溶液将pH调至近中性，抽滤、洗涤滤饼，烘干后硅胶柱层析分离纯化。

3.如权利要求2所述荧光分子探针的制备方法，其特征在于，还包含下列步骤：将纯化后产物溶解于无水乙醇中，加入2-氨基苯硫酚、37% HCl以及30% H₂ O₂ 溶液，常温下搅拌，反应完全后，将体系倒入水中，抽滤收集并洗涤滤饼，真空干燥后硅胶柱层析分离纯化可得黄色产物。

4.如权利要求3所述荧光分子探针的制备方法，其特征在于，还包含下列步骤：将纯化后的产物溶于乙醇中，加入2-甲基吡啶盐和1滴哌啶，40 ℃下水浴加热回流，待反应完成后，真空浓缩，并用硅胶柱层析分离纯化。

5.如权利要求4所述荧光分子探针的制备方法，其特征在于，还包含下列步骤：将纯化后的产物溶解于二氯甲烷中，在0 ℃下缓慢加入含有乙酰氯的二氯甲烷溶液，可见体系溶液颜色由黄色变成无色，待反应完全后，分别用水、饱和NaHCO₃ 溶液及饱和食盐水萃取，合并有机层，再用无水硫酸镁进行干燥，浓缩，最后烘干得到红色固体产物，即目标分子探针。

6.一种如权利要求1所述荧光探针在制备用于水合肼和亚硫酸氢根的顺序检测检测试剂中的应用，其特征在于，用于水合肼和亚硫酸氢根的顺序检测：将探针分子溶解在PBS缓冲溶液中，或者将探针分子溶解在甲醇、乙醇、乙腈或二甲亚砜有机溶剂中，或者将探针分子溶解在PBS缓冲溶液和上述有机溶剂任意比例的混合溶剂中，最终配制成浓度为10μM的探针溶液；然后在溶解有探针分子的上述探针溶液中加入不同浓度含有水合肼或亚硫酸氢根的待测溶液，观察其荧光变化。