[发明专利]一种适用于细菌和/或真菌的基因组DNA提取方法

权利要求书

1.一种适用于细菌和/或真菌的基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

除去临床标本中的液体部分以获得真菌和/或细菌的浓缩物；

在获得的浓缩物中，加入适量的溶菌酶、溶壁酶和玻璃珠，混合，以裂解浓缩物中所含真菌和/或细菌细胞的细胞壁获得细胞液；

使细胞液中蛋白组分变性降解以释放基因组DNA获得混合液。

2.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：所述基因组DNA提取方法还包括从混合液中分离细菌和/或真菌的基因组DNA的步骤；可选地，所述从混合液中分离细菌和/或真菌的基因组DNA的步骤为：将混合液中加入结合液，混合均匀后加至硅胶膜柱中使细菌和/或真菌的基因组DNA与硅胶膜柱中的吸附膜表面的硅羟基团结合；洗涤硅胶柱膜上的吸附膜以去除杂质；洗脱吸附膜上真菌和/或细菌的基因组DNA。

3.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：所述临床标本中细菌和/或真菌浓度为1.0×10^2-7CFU/ml，可选地为1.0×10^2-6CFU/ml，进一步可选地为1.0×10^2-5CFU/ml，更进一步可选地为1.0×10^2-4CFU/ml，再更进一步可选地为1.0×10^2-3CFU/ml。

4.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：所述临床标本未经过体外的细菌和/或真菌培养。

5.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：所述临床标本包括血液，泪液，脑脊液，胸腔积水，腹腔积水，肺泡灌洗液，尿液，鼻咽拭子，脓液，脓液，精液。

6.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：除去临床标本中的液体部分以获得真菌和/或细菌的浓缩物的操作包括：12000rpm离心5分钟，吸取抛弃上清。

7.根据权利要求6所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：含有红细胞的临床标本在除去液体部分前还包括在抗凝临床标本中加入红细胞裂解液以裂解红细胞的步骤。

8.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：所述细菌包括金黄色葡萄球菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎克雷伯菌，所述真菌包括光滑念珠菌、隐球菌。

9.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：在每500-1000μl初始体积的临床样本所获得的细菌和/或真菌沉淀浓缩物中，加入溶菌酶30-50mg、溶壁酶50-150U和直径分布为0.1-3mm的玻璃珠50-150mg；可选地，在每500-1000μl初始体积的临床样本所获得的细菌和/或真菌沉淀浓缩物中，加入溶菌酶40mg、溶壁酶100U和直径分布为0.1-3mm的玻璃珠100mg。

10.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：提取的细菌基因组DNA和/或真菌基因组DNA适用于PCR分析、基因序列直接测定、二代测序、基因芯片检测；所述PCR分析包括荧光定量PCR分析或数字PCR分析。