[发明专利]携带基因元件组合的载体组件、受体细胞文库、制备和筛选方法及用途

权利要求书

1.一种载体组件，其特征在于，包括一个或多个载体，以及插入在所述载体上的三种基因元件，该三种基因元件分别为编码一种或多种独特型synNotch受体的多种第一基因元件；载有一种或多种基因回路的第二基因元件；编码一种或多种独特型嵌合抗原受体的第三基因元件，

其中，当所述第一基因元件编码一种独特型synNotch受体时，所述第三基因元件必须编码至少三种独特型嵌合抗原受体，当所述第三基因元件编码一种独特型嵌合抗原受体时，第一基因元件必须编码三种独特型synNotch受体；

所述基因回路是预编程性的，为调节性顺势作用因子与转录因子的组合，在所述第一基因元件编码的synNotch受体活化时，对所述第三基因元件所编码的嵌合抗原受体产生表达调控效应；

synNotch受体包含细胞间信号传导受体Notch的核心调节结构域、合成性的胞外识别结构域和合成性的胞内转录结构域，所述嵌合抗原受体包括细胞内信号传导结构域、跨膜结构域和细胞外识别结构域，

synNotch受体和嵌合抗原受体的细胞外识别结构域均包括完整的抗体、组成抗体的重链、轻链或抗体片段。

2.根据权利要求1所述的载体组件，其特征在于，还包括编码一种或多种筛选标记蛋白的第四基因元件，

所述筛选标记蛋白包括药物抗性蛋白、自杀蛋白、荧光蛋白基因或分子标签蛋白中的任意一种或至少两种的组合，

当所述第一基因元件编码的synNotch受体活化时，通过第二基因元件预编程的基因回路实现同时对第三基因元件和第四基因元件产生表达调控效应。

3.根据权利要求1或2所述的载体组件，其特征在于：

其中，所述抗体片段包括抗体可变区、单链抗体、单域抗体或Fab段；

Notch核心调节结构域来源于人Notch基因、小鼠Notch基因、大鼠Notch基因、斑马鱼Notch基因或果蝇Notch基因，

合成性的胞内转录结构域包括TetR-VP64、Gal4-VP64、PIP-VP64、ZF21-16-VP64、ZF-42-10-VP64、ZF43-8-VP64、ZF54-8-VP64、ZFHD1-VP64、Gal4-KRAB、TetR-KRAB、PIP-KRAB、ZF21-16-KRAB、ZF-42-10-KRAB、ZF43-8-KRAB、ZF54-8-KRAB、ZFHD1-KRAB中的任意一种或至少两种的组合，

所述调节性顺势作用因子包括单个顺势作用因子和融合式顺势作用因子，融合式顺势作用因子包括一种或多种单个顺势作用因子的灵活组合，

所述单个顺势作用因子包括NFAT反应启动子元件、NFκB反应启动子元件、四环素反应元件、半乳糖代谢酶系基因启动子的UAS、PIP反应元件、ZFHD1反应元件、ZF21-16反应元件、ZF42-10反应元件、ZF43-8反应元件、ZF54-8反应元件、最小化CMV启动子、CMV启动子、SV40启动子、最小化IL-2启动子、最小化昆虫热休克蛋白70启动子、最小化HIVtata启动子中的任意一种或至少两种的组合；

所述融合式顺势作用因子包括4×NFAT、6×NFAT、5×NFκB、10×NFκB、7×TRE-P_CMV-min、5×UAS-P_CMV-min、4×PIR-P_CMV-min、8×PIR-P_CMV-min、8×PIR-P_hsp70min、4×ZFHD1RE-P_CMV-min、8×ZF21-16RE-P_CMV-min、8×ZF42-10RE-P_CMV-min、8×ZZF43-8R-P_CMV-min、8×ZF54-8RE-P_CMV-min、7×TRE-P_SV40、7×TRE-Pcmv、5×UAS-P_SV40、4×PIR-P_SV40、8×PIR-P_SV40、4×ZFHD1RE-P_SV40、8×ZF21-16RE-P_SV40、8×ZF42-10RE-P_SV40、8×ZF43-8RE-P_SV40、8×ZF54-8RE-P_SV40中的任意一种或至少两种的组合；

所述转录因子包括TetR-VP64(tTA)、Gal4-VP64、PIP-VP64、ZF21-16-VP64、ZF-42-10-VP64、ZF43-8-VP64、ZF54-8-VP64、ZFHD1-VP64、Gal4-KRAB、TetR-KRAB、PIP-KRAB、ZF21-16-KRAB、ZF-42-10-KRAB、ZF43-8-KRAB、ZF54-8-KRAB、ZFHD1-KRAB中的任意一种或至少两种的组合；

所述表达调控效应包括激活转录表达、增强转录表达、终止转录表达、抑制转录表达中的任意一种或至少两种的组合。