[发明专利]一种无酶电化学适体细胞传感器、制备方法及应用

权利要求书

1.一种无酶电化学适体细胞传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.利用原位生长法在玻碳电极工作区域电沉积金纳米粒子，用二次水冲洗后在室温下干燥；

S2.将捕获适体修饰在步骤S1获得的玻碳电极的工作区域，采用牛血清白蛋白溶液封闭非特异性结合位点，然后利用所述捕获适体捕获肝癌细胞；

S3.将信号标记物分散在1 mL水中，然后滴加在步骤S2获得的捕获有肝癌细胞的玻碳电极的工作区域内，在37℃下孵育1小时，并用磷酸盐缓冲溶液冲洗；

其中，所述信号标记物为甲苯胺蓝与血红素/G-四联体标记的Fe₃O₄@Au纳米复合材料；

所述信号标记物的制备包括以下步骤：

S31.将100 µL浓度为2 µM的巯基化的信号适体、50 µL浓度为3 mM的甲苯胺蓝与2 mL浓度为2 mg/mL的Fe₃O₄@Au核壳纳米粒子混合，在4℃下搅拌12个小时得到混合溶液A；

S32.将200 µL浓度为0.5 mg/mL血红素加入到所述混合溶液A中并在4℃下搅拌2小时，得到血红素/G-四联体结构的混合溶液B；

S33.将50 µL浓度为1wt%的牛血清白蛋白溶液加入到所述混合溶液B中反应30分钟，离心洗涤后，得甲苯胺蓝与血红素/G-四联体标记的Fe₃O₄@Au纳米复合材料，即信号标记物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述利用原位生长法在玻碳电极工作区域电沉积金纳米粒子的具体步骤为：

S11.将玻碳电极分别用0.3 µm粒径和0.05 µm粒径的Al₂O₃粉末抛光打磨并用二次水冲洗，再在无水乙醇和二次水的混合溶液中超声清洗2分钟后再用二次水冲洗干净，用吸耳球吹干所述玻碳电极；

S12.将步骤S11处理过的玻碳电极置于浓度为1wt%的HAuCl₄溶液中，在电位为-0.2 V的条件下循环伏安扫描30秒，使金纳米粒子电沉积到玻碳电极表面。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述捕获适体为巯基化的TLS11a适体，所述捕获适体的浓度为2~2.2 µM。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体为：将10 µL捕获适体滴到沉积有金纳米粒子的玻碳电极工作区域，在4℃下孵育16小时，滴加10 µL浓度为1wt%牛血清白蛋白溶液用于封堵非特异性结合位点，用磷酸盐缓冲溶液冲洗后，继续滴加20 µL不同浓度的肝癌细胞悬浮液，在37℃下孵育1小时，随后用磷酸盐缓冲溶液洗去未反应的肝癌细胞。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Fe₃O₄@Au核壳纳米粒子的粒径为380-385 nm。

6.根据权利要求1~5任一项所述制备方法制备得到的无酶电化学适体细胞传感器。