[发明专利]PCR反应抗干扰剂试剂及其在全血样品基因扩增中的应用

权利要求书

1.一种PCR反应抗干扰剂，其包括：

2.一种全血样本的基因扩增试剂组合，其特征在于，包括：

1×～100×的权利要求1所述的PCR反应抗干扰剂；

还包括PCR扩增试剂，所述PCR扩增试剂包括1×～100×的PCR缓冲液；

1×PCR缓冲液包括：

3.根据权利要求2所述的试剂组合，其特征在于，所述PCR扩增试剂中还包括PCR检测的引物和探针，还包括热启动Taq DNA聚合酶。

4.根据权利要求3所述的试剂组合，其特征在于，所述PCR检测引物为针对人CYP2C9*2(C430T)基因、人CYP2C9*3(A1075C)基因和/或人VKORC1(-G1639A)基因多态性位点的检测引物和探针。

5.根据权利要求4所述的试剂组合，其特征在于，

人CYP2C9*2(C430T)基因引物探针分别为：

野生上游引物F1：5’-GTTGGCGAGCATGGAGCAGC-3’，

突变上游引物F2：5’-GGCCGAGCAGCACTGATTAGT-3’，

公用下游引物R1：5’-CCGTCACTCACACTTGGCT-3’，

公用探针Probe1：5’-ACGCAGCCAGATGACTAGA-3’；

人CYP2C9*3(A1075C)引物和探针分别为：

野生上游引物F3：5’-GCACGATGACAAGACGTGCC-3’，

突变上游引物F4：5’-GCACGATGACAAGCCATAGC-3’，

公用下游引物R2：5’-CTTACGTTGAGATTGA-3’，

公用探针Probe2：5’-CCTCACAAGCGTGAC-3’；

人VKORC1(-G1639A)引物和探针分别为：

野生上游引物F5：5’-TACTTGAGCGACATACGC-3’，

突变上游引物F6：5’-TGAGCGACACACTCACAT-3’，

公用下游引物R3：5’-GAGATACCACTGACGGC-3’，

公用探针Probe3：5’-GAGATCGCTAACTGCTGC-3’。

6.根据权利要求5所述的试剂组合，其特征在于，所述还包括内参引物和探针，其中：

内参上游引物F7：5’-GATGCATCATGTGACGAG-3’，

内参下游引物R4：5’-CATCCAGCGTGACACA-3’，

内参探针Probe4：5’-TGAGATTGTCTAGAT-3’。

7.根据权利要求2～6任一项所述的试剂组合，其特征在于，还包括样本稀释液；所述样本稀释液包括双蒸水和EB溶液。

8.一种全血样本的基因扩增方法，其特征在于，以权利要求2～7任一项所述的扩增试剂组合对全血样本进行扩增，包括：

将全血与所述样本稀释液混合，经离心取沉淀；将所述沉淀与所述PCR抗干扰剂的混合液A，与PCR扩增试剂混合为混合液B，然后将混合液B上机扩增。

9.根据权利要求8所述的基因扩增方法，其特征在于，

所述全血与样本稀释液混合的体积比为1：25；

所述PCR反应抗干扰剂与样本稀释液的体积比为2:5，

所述混合液A与PCR扩增试剂的体积比为1:5。

10.根据权利要求8或9所述的基因扩增方法，其特征在于，所述PCR扩增试剂包括：