[发明专利]一种来自海虾的枝芽孢杆菌及其生产方法和应用

说明书

本发明公开了一种来自海虾的枝芽孢杆菌及其生产方法和应用，所述枝芽孢杆菌为革兰氏阳性杆状菌，在含有酪蛋白的固体培养基上的菌落特征：乳白色、不透明、表面光滑湿润、圆形、边缘齐整、中心稍突起、易挑取其菌落形态；所述枝芽孢杆菌的鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶反应呈阳性，接触酶、氧化酶、甲基红、尿激酶、V‑P、吲哚实验呈阴性。该枝芽孢杆菌可以在常温和高盐条件下生长，分泌蛋白酶，水解蛋白质产生风味物质，可以用于水产品发酵生产调味品，该枝芽孢杆菌在耐盐、耐碱、耐低温等特性更有利于工业化应用。

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体为一种来自海虾的枝芽孢杆菌及其生产方法和应用。

背景技术

蛋白质主要是是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。蛋白酶是一种可以通过打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键，从而能够有效分解蛋白质，是生物体内的一类酵素(酶)。按其降解多肽的方式分成内肽酶和端肽酶两类。前者可把大分子量的多肽链从中间切断，形成分子量较小的朊和胨；后者又可分为羧肽酶和氨肽酶，它们分别从多肽的游离羧基末端或游离氨基末端逐一将肽链水解生成氨基酸，因而常被用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面。目前研究发现产蛋白酶的真菌主要是曲霉属，细菌主要芽孢杆菌属，这些产生菌主要为陆源微生物。与陆源酶相比，来自海洋微生物产生的酶在耐盐、耐碱、耐低温等特性更有利于工业化应用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种来自海虾的枝芽孢杆菌及其生产方法和应用，以解决上述背景技术提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种来自海虾的枝芽孢杆菌包括枝芽孢杆菌，所述枝芽孢杆菌为革兰氏阳性杆状菌，在含有酪蛋白的固体培养基上的菌落特征：乳白色、不透明、表面光滑湿润、圆形、边缘齐整、中心稍突起、易挑取其菌落形态；所述枝芽孢杆菌的鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶反应呈阳性，接触酶、氧化酶、甲基红、尿激酶、V-P、吲哚实验呈阴性。

作为本发明的一种优选技术方案，所述枝芽孢杆菌的生长温度范围为20-45℃，生长pH范围为6-10，生长的NaCl浓度为0％-14％，大小0.6-0.8μm×2.5-4.0μm。

一种来自海虾的枝芽孢杆菌的生产方法，其步骤如下：

首先：将枝芽孢杆菌接种到肉汤培养基中，180rpm，装液量50mL/250mL，30℃培养12h，得种子液；

其次：将种子液以2％的接种量接种于产酶培养基中，180rpm，30℃培养33h，12000rpm离心10min；

最后：取上清液即为蛋白酶粗酶，产酶培养基的组成为：葡萄糖0.3％，豌豆粉1％，酪蛋白2％，NaCl7％，pH8.0。

作为本发明的一种优选技术方案，所述蛋白酶粗酶的适宜作用温度为50℃，在30℃-55℃温度范围时催化活力高,产生的蛋白酶的热稳定性好，在45℃下保温5h后酶活能保持60％以上的活力；该酶在pH5.0-9.0的范围内稳定。

一种来自海虾的枝芽孢杆菌的应用，所述枝芽孢杆菌运用于水解蛋白，以3％的菌液量接种至20g的海洋麻虾原料中，25℃培养箱培养20d，将发酵的海洋麻虾8000rpm，30min离心，取上清；将上清经前处理，过0.22μm的滤膜过滤后，氨基酸分析仪进行发酵产物氨基酸组分分析。

作为本发明的一种优选技术方案，对海虾蛋白的水解作用步骤如下：向经过灭菌处理的100mL海虾匀浆液中加入5mL粗酶液，以不加粗酶液酶解的样品为空白；于恒温振荡摇床中振荡酶解1-21h；酶解结束后，将酶解产物置于沸水中15min灭酶，冷却后8000rpm离心30min，收集上清液即为酶解液，采用氨基酸自动分析仪测定酶解液中游离氨基酸，同时设置空白对照。