[发明专利]猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗极其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。本发明由抗原和疫苗佐剂构成；所述抗原由猪圆环病毒2型抗原、猪肺炎支原体抗原和副猪嗜血杆菌抗原组成；所述猪圆环病毒2型抗原为毕赤酵母表达获得的cap蛋白，蛋白含量≥150μg/mL；所述猪肺炎支原体抗原为灭活的猪肺炎支原体菌液；所述副猪嗜血杆菌为灭活的副猪嗜血杆菌菌液；所述疫苗佐剂由水性高分子聚合物佐剂和复合多糖类免疫增强剂构成。本发明提供的猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗，在预防此三种猪病，提高猪生产性能表现出明显优势。

技术领域

本发明涉及兽用生物制品领域，特别涉及一种猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型引起的猪的一种传染病，引起仔猪断奶综合征、猪皮炎与肾病综合征及母猪繁殖障碍，其临床表现多样化。猪感染圆环病毒后，可引起严重的免疫抑制，从而继发或并发其他传染病，如猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌、猪溶血性链球菌等疾病。

猪支原体肺炎，又称猪地方性流行肺炎，是由猪肺炎支原体引起的以慢性、高度传染性、高发病率和低死亡率为主要特点的呼吸道疾病。感染猪长期发育不良、饲料转化率低、日增重下降，严重影响养猪业的经济效益。猪肺炎支原体和其他呼吸道疾病的病原，如猪繁殖与呼吸道综合征病毒、放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪流感病毒、圆环病毒2型混合感染时，会使病情加剧，引起猪的死亡。猪支原体肺炎是一种顽固性慢性病，抗支原体药物治疗一般可以抑制该病但很难清除，用药后咳喘症状消失，但停药后容易再次复发。

副猪嗜血杆菌定居于健康猪的上呼吸道，是猪上呼吸道的一种共栖菌。在转群、断奶后失去母源抗体保护、其他疾病导致免疫力下降时，表现出浆膜炎、脑膜炎等症状，可影响2周龄的哺乳仔猪和4个月的青年猪，主要在断奶后和保育期发病，多见于5-8周龄的猪。猪圆环和猪肺炎支原体属于免疫抑制病，导致猪群免疫力下降，给副猪嗜血杆菌的致病创造条件，这三种疾病常发生混感，造成猪只的发病及死亡，严重影响我国养猪事业的发展。

目前，市售疫苗中仅有相关单苗或者二联疫苗，免疫频率过大，导致猪只应激。同时由于抗生素滥用，导致耐药菌株的出现，使药物治疗趋于无效；本发明所提供的猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联疫苗，可做到一针三防，减少免疫次数及应激，切实解决养猪业的难题。

虽然也有关于圆环病毒2型亚单位疫苗的联苗发明专利，但圆环病毒2型Cap蛋白采用大肠杆菌表达系统获得。大肠杆菌表达系统为原核表达系统，缺乏对蛋白翻译后的加工修饰作用，因此不能对表达获得的圆环cap蛋白进行空间构型的折叠修饰，很难保证后期cap蛋白的VLP有100％活性。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗的制备方法。

本发明的技术方案为：

一种猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗，由抗原和疫苗佐剂构成；所述抗原由猪圆环病毒2型抗原、猪肺炎支原体抗原和副猪嗜血杆菌抗原组成；所述猪圆环病毒2型抗原为毕赤酵母表达并纯化获得的cap蛋白，蛋白含量≥150μg/mL；所述猪肺炎支原体抗原为灭活的猪肺炎支原体破碎菌液；所述副猪嗜血杆菌为灭活的副猪嗜血杆菌破碎菌液；所述疫苗佐剂由水性高分子聚合物佐剂和复合多糖类免疫增强剂构成。

毕赤酵母表达系统为真核表达系统，可以对表达蛋白进行后期的加工修饰，使目的蛋白更接近天然的空间构想，蛋白活性更好。本发明的三联灭活疫苗中，猪圆环病毒2型抗原为毕赤酵母表达并纯化的cap蛋白，该cap蛋白活性高，免疫效果好。

作为优选方案，所述水性高分子聚合物佐剂为Montanide Gel。

作为优选方案，所述复合多糖类免疫增强剂为中药多糖水溶性复合物。