[发明专利]一种同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法

权利要求书

1.一种同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法，所述小金制剂由以下重量份数的原料制成：人工麝香1-20份、草乌40-60份、乳香20-40份、五灵脂40-60份、地龙40-60份、木鳖子40-60份、枫香脂40-60份、没药20-40份、当归20-40份、香墨1-10份，其特征在于：所述六种代谢产物为乌头原碱、准噶尔乌头碱、里奥林、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸、蚯御素，测定方法包括以下步骤：

1）对血浆样品进行前处理，得待测样品溶液，血浆样品前处理方法为：精密量取正常大鼠空白血浆180μL，置于1.5mL EP管内，分别加入20μL各系列浓度的6种标准品的混合溶液和800μL溶度为400ng/mL原阿片碱和异嗪皮啶的混合内标溶液；涡旋振荡2min，4℃下13000rpm离心10min，移取上清溶液置于另一干净1.5mL EP管内；氮气仪设置为35℃下挥干溶剂，残渣用200μL甲醇溶液复溶，4℃下13000rpm离心10min，吸取上清溶液，2μL进样；

小金胶囊口服给药45min后大鼠的血浆加内标化合物的样品按上述前处理方法处理；

所述混合内标溶液的溶剂为体积比为1:3的甲醇-乙腈混合溶液；

2）进行HPLC-MS/MS检测，其中，色谱柱是Agilent Eclipse Plus C18色谱柱，规格为2.1×100mm，1.8μm，流动相A是0.05-0.5%甲酸水溶液，流动相B是乙腈，采用梯度洗脱，流速为0.1-0.5mL/min，柱温为25-40℃，质谱采用正负离子两种模式，电喷雾电离离子源，扫描方式为多反应离子监测模式，正离子模式下，检测乌头原碱、准噶尔乌头碱、里奥林、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸和正离子内标原阿片碱；负离子模式下，检测蚯御素与负离子内标异嗪皮啶，

所述梯度洗脱在正离子模式下，0.01-2.5min，10-80%乙腈；2.5-3.5min，80-100%乙腈；3.5-6min，100%乙腈；6-7min，100-10%乙腈；7-10min，10%乙腈，单次运行时间为10min；在负离子模式下，0.01-0.5min，30%乙腈；0.5-2min，30-80%乙腈；2-2.1min，80-30%乙腈；2.1-5min，30%乙腈，单次运行时间为5min；

所述质谱的干燥气温度为550℃；气帘气为40psi；碰撞气为中等；离子喷雾电压为+5500/-4500V；雾化气为50psi, 辅助加热气为55psi。

2.如权利要求1所述同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法，其特征在于：所述流动相A是0.1%甲酸水溶液。

3.如权利要求1所述同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法，其特征在于：所述流速为0.3mL/min。

4.如权利要求1所述同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法，其特征在于：所述柱温为35℃。