[发明专利]一种显著提高山苍子丛生芽生根率的方法

说明书

本发明公开的一种显著提高山苍子丛生芽生根率的方法，包括以下步骤，1)将山苍子丛生芽分离得单个芽；2)将所得单个芽的基部切口用抗褐变剂进行浸泡预处理，所述抗褐变剂中包括虾青素；3)将预处理后的单个芽接种至壮苗培养基进行壮苗培养；4)将壮苗培养后的单个芽转移到初代培养基进行初代生根培养，诱导根原基的形成；5)将经初代生根培养后的单个芽转移到继代培养基进行继代生根培养，得生根苗，所述继代培养基中包括山苍子根尖组织提取液。本发明提供的方法能够在培养过程中大大减少因组织褐变引起的丛生芽死亡，且显著提高了山苍子丛生芽的生根效率和根生长速度，提高了山苍子的快繁效率，促进了山苍子产业的发展。

技术领域

本发明涉及植物组织培养和离体快繁技术领域，更具体地，涉及一种显著提高山苍子丛生芽生根率的方法。

背景技术

山苍子(Litsea cubeba)是我国南方特有的工业原料和香料树种，其果实提炼的精油中柠檬醛含量极高，被广泛应用于医药、食品、化妆品等领域。建立山苍子的组培快繁体系，不仅能促进山苍子产业的发展，也可为山苍子的基础研究奠定基础。

然而目前山苍子丛生芽在进行生根诱导时存在基部切口易褐化、生根率不高、生根所需时间长的问题，这严重制约了山苍子离体快繁的效率。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能够显著提高山苍子丛生芽的生根率并显著缩短生根时间、减少组织褐化的方法，以提高山苍子的快繁效率，促进山苍子产业的发展。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种显著提高山苍子丛生芽生根率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)丛生芽的分离：将山苍子丛生芽分离得单个芽；

2)芽的预处理：将所得单个芽的基部切口用抗褐变剂进行浸泡预处理，所述抗褐变剂中包括虾青素；

3)壮苗培养：将预处理后的单个芽接种至壮苗培养基进行壮苗培养；

4)初代生根培养：将壮苗培养后的单个芽转移到初代培养基进行初代生根培养，诱导根原基的形成；同时使其适应生根培养的条件，诱导不定根的分化，并促进伤口的愈合，稀释伤口处产生的褐化物，避免褐化物对后续培养的影响；

5)继代生根培养：将经初代生根培养后的单个芽转移到继代培养基进行继代生根培养，得生根苗，所述继代培养基中包括山苍子根尖组织提取液。

优选的，步骤1)中所述分离具体为用无菌解剖刀将经诱导培养所得的山苍子丛生芽进行分离得到生长状态良好的单个芽。

优选的，步骤2)中所述抗褐变剂中含有蔗糖180～200g/L、预先溶于10mL乙醇中的虾青素200～300mg/L、硝酸银10～50mg/L，其余为蒸馏水；所述浸泡时间为3～5min；所述芽的预处理中还包括：将浸泡完成后的单个芽用无菌吸水纸将抗褐变剂吸干。

优选的，所述抗褐变剂的制备方法为：取180～200重量份蔗糖溶于蒸馏水中，置于1000体积份的量瓶中，随后加入0.01～0.05重量份的硝酸银，最后加入预先溶于8～12体积份乙醇中的虾青素，虾青素为0.2～0.3重量份；最后蒸馏水定容至刻度即得。

优选的，步骤3)中，所述壮苗培养基为：1/2MS+0.8～1.2mg/L GA₃+1.3～1.6mg/L6-BA+0.3～0.5mg/L IBA+蔗糖25～30g/L+琼脂8～10g/L；所述壮苗培养的时间为7天，温度为24～28℃，光照时间为12小时/天。

优选的，步骤4)中，所述初代培养基为：1/2MS+0.3～0.5mg/L IBA+0.1～0.3mg/LNAA；所述初代生根培养条件为：黑暗条件下培养1-2天，温度为24～28℃。