[发明专利]一种产脲酶抑制剂的菌株筛选方法及减少粪便氨排放的方法

说明书

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种产脲酶抑制剂菌株的筛选方法及减少粪便氨排放的方法。该筛选方法包括：初筛得到不产脲酶的菌株和产脲酶的菌株，再筛选得到产脲酶抑制剂的菌株。该筛选方法安全、高效，成本低廉，所得菌株具有产出脲酶抑制剂的活性，具有显著的降氨能力，可用于畜禽粪便氨减排。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种产脲酶抑制剂的菌株筛选方法及减少粪便氨排放的方法。

背景技术

近几年来，随着集约化、规模化养殖业的快速发展，畜禽排泄物氨的挥发和排放引起的环境污染越来越受到人们的关注，氨的挥发和排放不仅对地表水和土壤造成污染，而且带来严重的空气污染，对饲养动物、饲养员及饲养场周围居民的健康造成很大危害。在当前的养殖粪便处理系统中，畜禽粪便中含有的大量尿素(猪等畜类)或尿酸(鸡等禽类，经分解后可转变为尿素)很容易被微生物产生的脲酶分解成氨而挥发，使排泄物中75％的氮都因此而损失，还导致了畜禽粪便的N/P比失调，如新鲜猪粪的N/P比约为5∶1，而贮存后的猪粪N/P比却为1∶1，氮元素大量流失，降低了肥效。因此，减少畜禽粪便的氨排放对于环境保护、畜禽粪便再利用具有重要意义。

目前，在生产实践中脲酶抑制剂已被用来降低氨排放。现有的脲酶抑制剂主要有无机化合物类(如重金属盐类、硼酸盐、氯化物、氟化物、磷酸盐、硝酸镍等)、有机化合物类(如异位酸类、尿素衍生物、羟胺、氧肟酸类、多聚甲醛、醌、多元酚、杂环硫醇等)和植物提取物类(如丝兰属提取物、樟科植物提取物、大蒜提取物等)。无机和有机化合物存在安全性问题，对人畜和环境有毒害和污染，难以满足养殖业需求。植物提取物类相对安全，但植物生长周期长，原料来源不稳定，提取工艺较为复杂，规模化生产成本高、效率较低，且对脲酶的抑制作用较低，对于减少氨气挥发的能力有限。

发明内容

针对现有的脲酶抑制剂对人畜和环境有毒害和污染、对氨的抑制率不高、规模化生产成本高、效率低的技术问题，本发明提供一种产脲酶抑制剂菌株的筛选方法。

以及，本发明还提供用上述产脲酶抑制剂菌株的筛选方法在减少粪便氨排放中的应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种产脲酶抑制剂菌株的筛选方法，具体包括以下步骤：

步骤a、将畜禽粪便制成菌悬液，用NA培养基常规培养，将培养所得菌落接种于含有尿素和酸碱指示剂的平板初筛培养基中培养；

步骤b、从步骤a培养所得菌落中挑取周围未变色的菌落，筛选不产脲酶的菌株制成待选样品发酵液；

步骤c、从步骤a培养所得菌落中挑取周围变色的菌落，制成产脲酶菌株发酵液；

步骤d、用步骤c所得产脲酶菌株发酵液从步骤b所得各所述待选样品发酵液中筛选出产脲酶抑制剂的菌株。

本发明所保护的筛选方法先从畜禽粪便中筛选得到产脲酶菌株(步骤c)，再利用该产脲酶菌株对同一来源的畜禽粪便样品进行产脲酶抑制剂菌株的筛选(步骤d)，从而能够得到具有产脲酶抑制剂的高活性菌株，所得菌株对于畜禽粪便的氨减排效果可以达到降低90％以上，可有效减少畜禽粪便氨气对环境的污染，且便于畜禽粪便资源化高效利用。由本筛选方法得到的菌株安全无毒，对环境不产生二次污染，且本筛选方法实行起来简便易行，不需要昂贵复杂的设备，成本低廉，一般的微生物实验室都可实现，使所得菌株容易获得，便于大规模生产。步骤b所得的待选样品发酵液中的菌株为不产脲酶的菌株。将从相同畜禽粪便样品中筛选的产脲酶菌株的发酵液与上述不产脲酶菌株的发酵液混合，以不产脲酶菌株的发酵液对产脲酶菌株发酵液的脲酶活性的抑制作用为指标，可筛选出具有脲酶抑制活性且更适合于降低畜禽粪便氨排放的菌株，并且筛选出的菌株用于处理畜禽粪便时更容易迅速增殖，提高处理效率。