[发明专利]一种防治核桃炭疽病的生防菌株JK17及其筛选方法、应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种防治核桃炭疽病的生防菌株JK17及其筛选方法、应用。该生防菌株JK17的保藏编号为：CGMCC No.18726。本发明通过从无病虫害的核桃叶片中分离纯化得到的生防菌株‑假单胞菌属中的荧光假单胞菌，能够防治核桃炭疽病，防治效果能够达到84%以上，抑菌效果好；本发明提供的生防菌株，能够减少农药使用，安全无毒，实现对核桃保护和治疗的双重目的。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种防治核桃炭疽病的生防菌株JK17及其筛选方法、应用。

背景技术

核桃（Juglans regia L.），核桃属胡桃科，在我国栽培历史悠久，被广泛种植，是我国重要的“木本粮油”战略树种。因为核桃具有很高的经济、生态和社会效益，在国内、国际市场上的需求量不断增加。随着核桃栽培面积的不断扩大，病害也日趋严重。炭疽病是危害核桃生产的主要病害之一，山东省泰安、济南、济宁等核桃主产区炭疽病的发病率高达90%、病果率30%以上。炭疽病主要危害核桃的果实，也危害叶片、芽和嫩梢部位，感病后易导致早期落果、烂果或果仁干瘪等，严重影响产量和品质。目前普遍认为造成核桃炭疽病的病原有两种，胶胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides (Penz.)Penz．＆Sacc．和尖胞炭疽菌Colletotrichum acutatum J.H．Simmonds ex J．H．Simmonds］。

核桃炭疽病已成为制约核桃产业发展的主要因素。为了防治炭疽病，生产上主要以使用化学杀菌剂为主，因此每年需要花费大量农药、资金和劳动力。由于杀菌剂在果园中长期使用，导致核桃炭疽病菌产生抗药性，使炭疽病的防治难度加大。而且长期大量使用化学农药势必造成环境污染，严重危害人体健康。因此，寻求安全、无毒、有效控制核桃炭疽病的新方法成为当务之急。目前，学术界对于化学药剂的替代品生防菌的研究报道逐年增加，利用生防菌对病害进行生物防治是必然趋势。

发明内容

本发明的目的在于提供一株防治核桃炭疽病的生防菌株JK17。

本发明还提供了一种上述防治核桃炭疽病的生防菌株的筛选方法。

本发明的再一目的为提供了上述生防菌株在防治核桃炭疽病中的应用。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一株防治核桃炭疽病的生防菌株JK17，其保藏编号为：CGMCCNo.18726。

本发明还提供了一种上述防治核桃炭疽病的生防菌株JK17的筛选方法，，包括以下步骤：

（1）样品采集及分离：从核桃园中采集无病虫危害的核桃叶片，取0.5~1.0cm叶片用75%酒精消毒30s，再用1.0％NaClO处理10min，最后用无菌水冲洗三次；将经过表面消毒的叶片加5mL无菌水研磨，静置10min；

（2）静置后按照梯度浓度1×10²、1×10³和1×10⁴用无菌水依次进行稀释，分别取100μL涂布在NA平板上，置于28℃恒温培养箱中培养；待平板长出菌落后，根据菌落的形态特征，挑取单个菌落，经划线、纯化后得到细菌菌株JK17，4℃冰箱保存在NA斜面上。

本发明还提供了一种上述生防菌株JK17在防治核桃炭疽病中的应用。

进一步的，所述生防菌株在防治核桃炭疽病时，采用活化后的菌株或菌株发酵液。

上述菌株发酵液采用以下方法制备而成：将JK17菌株置于100 mL牛肉膏蛋白胨液体培养基（NB）中，28℃振荡培养2d以上，JK17菌株菌液浓度达到10⁵～10⁶CFU/mL，发酵菌液8000rmp离心20min后取上清液，用0.22μ滤膜过滤获得无菌滤液。