[发明专利]半乳糖地霉ZJPH1810及制备(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇应用

权利要求书

1.半乳糖地霉(Galactomyces geotrichum)ZJPH1810，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2019822，保藏日期：2019年10月14日，地址：中国武汉武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述半乳糖地霉ZJPH1810在制备(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：以半乳糖地霉ZJPH1810经发酵培养获得的湿菌体为酶源，以2,6-二氯-3-氟苯乙酮为底物，以pH 2.96～10.6的磷酸缓冲液为反应介质构成转化体系，在25～50℃、150～250rpm条件下进行反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物用量以缓冲液体积计为0.1～10g/L，湿菌体用量以缓冲液体积计为50～550g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述转化体系中添加有辅助底物，所述辅助底物为下列一种或任意几种的混合：葡萄糖、麦芽糖、海藻糖、乳糖、甘油、异丙醇、半胱氨酸、丙氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸；所述辅助底物添加量以缓冲液体积计为20～200g/L。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述辅助底物为甘油和葡萄糖，所述甘油添加量以缓冲液体积计为100g/L，葡萄糖添加量以缓冲液体积计为80g/L。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述转化体系由酶源、底物、辅助底物和天然低共熔溶剂组成，所述天然低共熔溶剂质量添加量以缓冲液体积计为2～10g/L；所述天然低共熔溶剂为下列之一：甜菜碱:赖氨酸、氯化胆碱:赖氨酸、L-肉碱:赖氨酸、L-脯氨酸:赖氨酸、甜菜碱:甘氨酸、氯化胆碱:甘氨酸、L-肉碱:甘氨酸、L-脯氨酸:甘氨酸、甜菜碱:海藻糖、L-脯氨酸:海藻糖。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述转化体系由酶源、底物、辅助底物、天然低共熔溶剂和表面活性剂组成，所述表面活性剂为吐温-80，吐温-60，吐温-20，司盘-80或司盘-20；所述表面活性剂的添加量以缓冲液体积计为2～20g/L。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述底物加入量以缓冲液体积计为5g/L，酶源加入量以缓冲液体积计为350g/L；所述辅助底物为葡萄糖和甘油，其中甘油添加量以缓冲液体积计为100g/L，葡萄糖添加量以缓冲液体积计为80g/L；所述天然低共熔溶剂为L-肉碱:赖氨酸，加入量以缓冲液体积计为5g/L；所述表面活性剂为司盘-80，添加量以缓冲液体积计为5g/L。

10.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述酶源按如下方法制备：

(1)斜面培养：将半乳糖地霉ZJPH1810接种至斜面培养基，25～30℃培养48h，获得斜面菌种；斜面培养基终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH₄)₂SO₄ 2g/L，KH₂PO₄ 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，琼脂粉15～20g/L，溶剂为水，pH值6.5；

(2)种子培养：将斜面菌种接种至种子培养基中，25～30℃、150～250rpm培养10～24h，获得种子液；种子培养基终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH₄)₂SO₄ 2g/L，KH₂PO₄ 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，溶剂为水，pH值6.5；

(3)发酵培养：将种子液以体积浓度为4～10％的接种量接种至发酵培养基中，装液量为80mL/250mL摇瓶，25～30℃、150～250rpm培养24～28h，发酵结束后，将发酵液离心，所得沉淀用0.1M、pH 6.5磷酸缓冲液洗涤，收集湿菌体，即为酶源；发酵培养基终浓度组成为：葡萄糖24.45g/L，蛋白胨15.75g/L，(NH₄)₂SO₄ 21.39g/L，CaCl₂ 0.111g/L，溶剂为水，pH值6.5。