[发明专利]一种包被蛋白的氨基微球及其制备方法与血管紧张素I检测试剂盒

说明书

一种包被蛋白的氨基微球及其制备方法与应用与血管紧张素I测定试剂盒，属于固相试剂技术领域。解决了现有制备包被蛋白的微球的方法中，存在的蛋白与微球之间的有效结合度有限、偶联效率低、工艺复杂、成本高的问题。本发明的制备方法，步骤如下：先将氨基微球与活化剂分别溶于pH为4.5的缓冲液中；然后将得到的含有氨基微球的缓冲液与含有活化剂的缓冲液混合，活化，得到含有活化微球的溶液；然后加入蛋白，偶联，得到含有蛋白偶联活化微球的溶液；再加入pH为8.5缓冲液反应，反应完成后，加入封闭剂封闭，即得包被蛋白的氨基微球。该制备方法大大提高了化学偶联的效率，同时操作更加简单，成本更加低廉。

技术领域

本发明属于血管紧张素I检测技术领域，具体涉及一种包被蛋白的氨基微球及其制备方法与血管紧张素I检测试剂盒。

背景技术

高血压是最常见的心血管病，是全球范围内的重大公共卫生问题。高血压可导致脑血管、心脏、肾脏的病变，是危害人类健康的主要疾病。我国现有高血压患者2亿多人，而世界各地的患病率高达10％～20％。随着经济发展，人民生活水平的提高，高血压已日益成为一种世界性的常见疾病。

血管紧张素Ⅰ(Angiotensin I，Ang I)是血管紧张素转化过程中的一种中间产物，它是血管紧张素原(Angiotensinogen)经肾素(Renin)作用水解产生的一种十肽，其收缩血管的活性很弱，必须经肺脏转换酶的作用成为血管紧张素Ⅱ，才会有明显的活性。血管紧张素II能使全身小动脉收缩而升高血压，此外，还可以促进肾上腺皮质分泌醛固酮，醛固酮作用于肾小管，起保钠、保水、排钾作用，从而引起血量增多，血压升高。

正常情况下，由于肾素分泌很少，血中血管紧张素也少，对血压调节不起明显作用。但当失血过多时，由于动脉血压显著下降使肾血流量减少，血管紧张素生成增多，对防止血压过度下降而使血压回升起重要作用。此外，血管紧张素可引起血管强烈收缩，但在正常情况下不参与血压调节。当机体处于失血等情况而使循环血量减少时，该激素在血中浓度将显著升高，对保持循环血量和维持动脉血压起一定作用。

临床上血管紧张素I对高血压的诊断与分型，以及评估冠心病、心力衰竭等疾病的严重程度和预后都有重要意义。原发性高血压、特发性或假性醛固酮增多症、肾上腺癌、肾上腺皮质增多症激素合成缺陷等疾病会导致血管紧张素I降低；而继发性醛固酮增多症、肾功能减退、肾炎、充血性心力衰竭、肾血管瘤、分泌肾素的肾球旁器增生症、嗜铬细胞瘤、肝硬化等疾病会导致血管紧张素I升高。

现有技术中，血管紧张素I一般通过胶乳增强免疫比浊法进行检测。胶乳增强免疫比浊法中，需采用物理或化学的方法将蛋白吸附或偶联到胶乳微球的表面，物理吸附法稳定性不理想，蛋白容易从微粒上脱落，且易受样本中干扰物质影响，造成测试结果不准确；化学偶联方法将蛋白可通过多种化学物质搭桥偶联到微球上，但这种方法蛋白与微球之间的有效结合度有限，偶联效率低，且工艺复杂、试剂成本也高。

发明内容

有鉴于此，本发明为解决现有技术制备包被蛋白的微球的方法中，存在的蛋白与微球之间的有效结合度有限、偶联效率低、工艺复杂、成本高的技术问题，提供一种蛋白包被的氨基微球及其制备方法与应用。

本发明解决上述技术问题采取的技术方案如下。

本发明提供一种包被蛋白的氨基微球的制备方法，步骤如下：

步骤一、将氨基微球与活化剂分别溶于pH为4.5的缓冲液中，得到含有微球的缓冲液和含有活化剂的缓冲液；

步骤二、将含有氨基微球的缓冲液与含有活化剂的缓冲液混合，活化，得到含有活化微球的溶液；

步骤三、将蛋白加入到含有活化微球的溶液中，偶联60～90min，得到含有蛋白偶联活化微球的溶液；

步骤四、再将pH为8.5的缓冲液加入到含有蛋白偶联活化微球的溶液中，反应，反应完成后，加入封闭剂封闭30min以上，即得包被蛋白的氨基微球。