[发明专利]一种测定人血浆中多西他赛药物浓度的方法

权利要求书

1.一种测定人血浆中多西他赛药物浓度的方法，采用高效液相色谱-串联质谱法进行检测，其特征在于：其检测方法包括如下步骤：

步骤1：标准工作液的配制

准确称取多西他赛标准品置于于离心管中，使用纯甲醇溶解，配成标准储备液S1，将标准储备液S1用甲醇水溶液进行稀释，配制多个标准工作液，冷冻保存；

步骤2：内标工作液的配制

准确称取多西他赛-D9标准品置于离心管中，使用纯甲醇溶解，配成标准储备液S2，将标准储备液S2用甲醇水溶液进行稀释，得到内标工作液，冷冻保存；

步骤3：检测血液的离心

取待检测血液样本，进行离心分离操作，取上清液得血浆，将上述血浆冷冻保存至分析前备用；

步骤4：待测样品处理

A、使用移液枪移取步骤2中所述内标工作液于离心管中，加入步骤3中所述血浆，以涡旋震荡的方式进行混合；

B、使用移液枪移取萃取剂加入A中的离心管中，以涡旋震荡的方式进行混合，然后进行离心分离操作，得到上清液；

C、使用移液枪移取B中的上清液于离心管中，氮气吹干，加入甲醇水溶液，以涡旋震荡的方式进行混合，然后进行离心分离操作，得到上清液，所得上清液即为待测样品；

步骤5：样品的测定

D、标准曲线的绘制

首先将步骤1中不同浓度的标准工作液分别和正常人空白血浆混合制成标准工作血药，按照步骤4进行处理，并将得到的标准曲线样品进行检测，得出不同标准曲线样品的多西他赛和内标色谱图，在色谱图中分别得到标准目标物峰面积和内标物峰面积，以标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以标准工作液配制后血浆中待测目标物血药浓度与内标工作液浓度的比值即多西他赛相对浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测数据通过加权最小二乘法进行线性回归，得到标准曲线方程为y＝a×x+b，并且得出权重系数a和b；

E、待测样品的测定

使用高效液相色谱串联质谱分析仪器对C中待测样品进行检测，得出上述待测样品的多西他赛和内标色谱图，在色谱图中得到待测目标物峰面积和内标物峰面积，计算出待测目标物峰面积和内标物峰面积比值y，带入到D中的标准曲线方程中计算多西他赛的相对浓度x。

所述高效液相色谱-串联质谱法条件为：采用proshell 120 EC-C18色谱柱(3.0*50mm，2.7μm)，柱温为30℃，流动相A相为1mmol/L甲酸铵水，B相为纯乙腈进行梯度洗脱，流速0.4mL/min，进样量5μL，分析时间3.5min；质谱采用电喷雾离子源，在正离子电离模式下，选择多反应检测模式的质谱扫描方式进行测定，多西他赛与内标多西他赛-D9母离子分别为808.30、817.30，子离子分别为527.1、227.2，保留时间分别为2.24、2.23min。

2.根据权利要求1所述的一种测定人血浆中多西他赛药物浓度的方法，其特征在于：步骤1中所述标准工作液的配置个数为8。

3.根据权利要求2所述的一种测定人血浆中多西他赛药物浓度的方法，其特征在于：8种所述标准工作液分别为40ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL、10000ng/mL和20000ng/mL浓度的多西他赛溶液。

4.根据权利要求1所述的一种测定人血浆中多西他赛药物浓度的方法，其特征在于：步骤1、步骤2和步骤4C中的所述甲醇水溶液均由甲醇和水组成，两者质量比为1:1。