[发明专利]含维生素C的促进脐带间充质干细胞增殖的培养基

说明书

本发明公开了维生素C在促进脐带间充质干细胞增殖且不影响干细胞活性、活率和分化老化中的应用，在制备促进脐带间充质干细胞增殖且不影响干细胞活性、活率和分化老化的培养基中的应用。本发明发现，在使用现有干细胞培养基使干细胞贴壁后，加入AA(无需增加其它的复杂成分)，即可以促进干细胞的增殖，通过数据也证明即使AA能显著在短时间内提高干细胞的数量，但干细胞的活性，活率以及细胞周期均与不使用添加的对照培养基无差异，说明AA的补充仅会提高细胞增殖，而不会降低细胞活性，降低细胞活率，促进干细胞老化。

技术领域

本发明涉及维生素C在促进脐带间充质干细胞增殖且不影响干细胞活性、活率和分化老化中的应用。以及含维生素C的促进脐带间充质干细胞增殖的培养基，属于细胞培养技术领域。

背景技术

目前，干细胞作为一种新的治疗手段正在广泛地应用于多种疾病的临床试验研究当中，绝大多数的临床试验均证明干细胞能够较好地改善病症。然而，干细胞在未来临床应用中则要解决如何在更短时间内增殖到符合使用需求的细胞数量，同时保证大规模扩增后间充质干细胞仍然保持良好的细胞活性，并且增殖的细胞保持多潜能性和归巢能力，从而保证干细胞的医用价值不打折扣。

间充质干细胞是成体干细胞的一种，即在成体中一类具有可分化可增殖的细胞。目前中国有51项利用干细胞进行的临床试验，其中脐带间充质干细胞项目占总项目的比例超过51％。因此，对于如何有效快速增殖脐带间充质干细胞，同时保证细胞的活性和稳定性是目前亟待解决的问题。

细胞周期是指通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程。细胞周期可以分为四个时期，细胞按照G₁-S-G₂-M路线正常运转。G₀/G₁期被认为是细胞静默和生长期，S期是DNA合成期，G₂期是有丝分裂准备期，M期为使染色体等分到两子细胞的过程。干细胞的相对静止(即大部分处于G₀/G₁期)可以防止细胞未成熟耗竭(Premature exhaustion)。目前有研究发现脐带间充质干细胞在传代培养到第33代，较第3代细胞的G₀/G₁减少17.9％、S+G₂/M增加103.4％、细胞凋亡率增加316.7％，差异均有显著性意义(P0.01)(Chao X,Ji-dong L,Jing L,Wen-zhe M,Yang-qiu L.Biologicalactivity and restriction of human umbilical cord mesenchymal stem cellsduring long-termculture in vitro.J Clin Rehabil Tissue Eng Reserach 2011；15:1750–4.doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.10.009.)。另外，第12代脐带间充质干细胞的增殖能力和向成脂肪细胞分化诱导率显著下降，而向成骨细胞分化诱导率及细胞衰老率显著上升(程梅,王洪岩,于大海,李华伟,杜鹏程,魏负禾,张颢,邱林,马军.脐带间充质干细胞长期体外培养的生物学特性及遗传稳定性[J].中国生物制品学杂志,2014,27(3):356-360.)。因此，虽然细胞传代能增加细胞的数量，但细胞的老化和分化也随着细胞增殖而加快。因此，本发明期望通过筛选发现一种/多种能够促进脐带间充质干细胞增殖且不影响细胞活性和分化的配方，该配方将有助于突破干细胞应用的瓶颈。