[发明专利]总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂：

所述R1试剂包括链霉亲和素磁颗粒；

所述R2试剂包括化学发光标记物标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体；

所述R3试剂包括偶联标记物标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.01％～1％。

3.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05～3μm。

4.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，化学发光标记物标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体的浓度为≥0.1μg/mL。

5.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体中，总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体与化学发光标记物摩尔比为1:(1～20)；所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。

6.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R3试剂中，偶联标记物标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体的浓度为≥0.7μg/mL。

7.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体中，总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:(1～20)；所述偶联标记物为生物素。

8.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括化学发光激发液，化学发光激发液包括A液和B液，A液为过氧化氢溶液和硝酸溶液，B液为氢氧化钠溶液。

9.根据权利要求1所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括总Ⅰ型胶原氨基端延长肽校准品；

所述总Ⅰ型胶原氨基端延长肽校准品是浓度分别为0ng/mL、25ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、750ng/mL和1500ng/mL的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽标准溶液，通过标准品稀释液稀释总Ⅰ型胶原氨基端延长肽纯品制成。

10.权利要求1～9任何一项所述的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、R1试剂的制备

将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂，得到R1试剂；

步骤二、R2试剂的制备

将总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体放入离心管中离心，然后加入碳酸缓冲液，混匀后加入化学发光标记物溶液离心，将离心管密封后放入避光暗盒中，然后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，然后放入缓冲液中稀释，得到R2试剂；

步骤三、R3试剂的制备

将总Ⅰ型胶原氨基端延长肽单克隆抗体放入离心管中离心，然后加入TRIS缓冲液，混匀后加入偶联标记物溶液离心，反应适当时间后加入赖氨酸继续反应，最后将反应液用脱盐柱纯化、收集后放入缓冲液中稀释，得到R3试剂；

步骤四、将R1试剂、R2试剂和R3试剂分装，得到总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的化学发光免疫检测试剂盒。