[发明专利]脂代谢紊乱动物模型构建以及利用AAV-CRISPR/CAS9的修复

权利要求书

1.一种制备脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型的方法，包括：针对啮齿类动物基因组中编码低密度脂蛋白受体第208位的密码子，利用CRISPR/Cas系统引入终止子；所述CRISPR/Cas系统包括：sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；和含有突变位点的外源模板链序列。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含有突变位点的外源模板链序列将低密度脂蛋白受体第208位突变为终止子，其具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在啮齿类动物生长后，进行高脂饮食诱导，获得脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型。

4.一种用于制备脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型的试剂盒，其中包括：

CRISPR/Cas系统，包括sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；和

含有突变位点的外源模板链序列。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的含有突变位点的外源模板链具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：高脂饮食，所述高脂饮食为食物中含有高于20％的脂肪和高于0.2％的胆固醇。

7.权利要求1～3任一所述的方法或权利要求4～6任一所述的试剂盒在制备脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型中的应用。

8.利用权利要求1～3任一所述的方法或权利要求4～6任一所述的试剂盒获得的脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型的应用，用于：

作为筛选缓解或治疗脂代谢紊乱疾病的候选药物或治疗剂的动物模型；或

用于作为研究脂代谢紊乱疾病的动物模型；或

用于作为研究脂代谢紊乱疾病的药物的动物模型。

9.一种靶向性修复低密度脂蛋白受体的方法，包括：以腺相关病毒递送Cas酶编码基因以及针对低密度脂蛋白受体基因的sgRNA至细胞内，从而靶向性修复低密度脂蛋白受体；所述腺相关病毒携带一供体序列，该供体序列来自低密度脂蛋白受体基因且包含编码野生型低密度脂蛋白受体第208位的密码子。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，Cas酶的表达盒被置于腺相关病毒载体1中，sgRNA和供体序列片段的表达盒被置于腺相关病毒载体2中，分别包装为腺相关病毒1和腺相关病毒2；其中，

所述Cas酶的表达盒中，包含TBG启动子，核定位信号序列，Cas酶编码核酸序列，末端反向重复序列；

所述sgRNA和供体序列片段的表达盒中，包含U6启动子，sgRNA，供体序列，末端反向重复序列；所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，以腺相关病毒感染细胞时，腺相关病毒1和腺相关病毒2按照滴度的比例为1:(7～15)；较佳地为1:(8～12)；更佳地为1:10。

12.一种试剂盒，其中包括腺相关病毒载体或由该载体包装而成的腺相关病毒，所述腺相关载体包含：

Cas酶编码基因；

针对低密度脂蛋白受体基因的sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

供体序列，该供体序列来自低密度脂蛋白受体基因且包含编码野生型低密度脂蛋白受体第208位的密码子。

13.如权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述的供体序列长1800～2000bp；较佳地长1900±50bp；更佳地，所述的供体序列具有SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。