[发明专利]一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向FGFR4的嵌合抗原受体CAR‑FGFR4和靶向DR5的嵌合抗原受体CAR‑DR5，CAR‑FGFR4包括氨基端到羧基端顺次连接的靶向FGFR4单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区，CAR‑DR5包括氨基端到羧基端顺次连接的靶向DR5单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区；靶向FGFR4的单链抗体包括以下中的至少一种：(a)如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH以及如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL；(b)如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH以及如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，是全世界范围内第二大癌症死亡原因，己经严重威胁到了人们的健康和生活。临床中常见的肝癌治疗方法主要有手术切除、肝移植、化学药物治疗和放射治疗等。然而，由于肝癌早期病症不明显因而不易被检测，大部分病人确诊时己处于中晚期，失去手术治疗和肝移植的机会。实际治疗中约有90％的肝癌患者需要接受药物治疗。现有常用的抗肿瘤药物虽然可以有效延长患者生存期，但在临床应用中普遍存在选择性低、毒副作用大等问题。即便是靶向药物也存在长期使用后容易诱发肿瘤耐药性的问题。例如2007年批准的多激酶抑制剂索拉菲尼，但仅仅将总生存期提高3个月。由此可见，临床上为肝癌寻找安全有效的疗法依然是个难题。

死亡受体5(DR5)又名肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2)，在多种肿瘤组织高表达，尤其是肺癌、乳腺癌、卵巢癌、直肠癌、宫颈癌等，而在大多数正常细胞几乎不表达，成为理想的靶点。成纤维细胞生长因子受体家族有四个成员，FGFR1-4，其激酶域同源性高达74-92％。通过分析FGFR家族的结构发现在552号氨基酸上FGFR4与其他成员不同，FGFR4上是半胱氨酸，而其他成员在该位点是酪氨酸。可以尝试利用这半胱氨酸的特性来设计抑制剂，达到高选择性的靶向FGFR4。FGFR4在多种肿瘤中存在过表达，例如肝癌、乳腺癌、胃癌等。目前在制药产业领域，FGFR4的抑制剂H3B-6527已获得美国FDA授予的孤儿药资格。FGFR4选择性抑制剂基本都是基于Cys552的共价可逆或不可逆抑制剂，一旦这个位点突变很可能导致耐药情况的产生。

免疫细胞治疗是现有技术中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其治疗肿瘤具有特异性强、几乎无毒副作用的巨大优势弥补了传统疗法的弊端，在国内外已经用于临床治疗恶性肿瘤，嵌合抗原受体T细胞技术(CAR-T)为当前过继性细胞回输治疗技术最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到清除恶性肿瘤细胞的目的而受到广泛的关注和研究。目前还未有同时靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞的制备和研究。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向FGFR4的嵌合抗原受体CAR-FGFR4和靶向DR5的嵌合抗原受体CAR-DR5，CAR-FGFR4专一性的靶向FGFR4，CAR-DR5专一性的靶向DR5，从而促进T细胞在患者体内的扩增，高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，有效抑制肿瘤细胞逃逸的发生，更好的维持嵌合抗原受体T细胞的活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本发明还提供了靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向FGFR4的嵌合抗原受体CAR-FGFR4和靶向DR5的嵌合抗原受体CAR-DR5，所述CAR-FGFR4的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向FGFR4的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR-DR5的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向DR5的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；

其中，所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括以下中的至少一种：